FLUOREYE是一種熒光檢測(cè)解決方案，專為與現(xiàn)有系統(tǒng)無(wú)縫集成而設(shè)計(jì)，無(wú)需額外空間或設(shè)備。它有兩個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)和兩個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)，可實(shí)現(xiàn)集成的熒光信號(hào)定量和后續(xù)均一化，無(wú)需用戶干預(yù)。在這里，我們展示FLUOREYE可用于測(cè)量被SYBR™ Safe（一種高靈敏度的熒光核酸染料）染色的活細(xì)胞熒光強(qiáng)度，從而確定96孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞的融合度。因此，F(xiàn)LUOREYE將其用途擴(kuò)展到細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。在Hamilton自動(dòng)化液體處理設(shè)備上使用FLUOREYE進(jìn)行自動(dòng)細(xì)胞融合度測(cè)量，可以在96孔板中追蹤培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)，而不需要顯微鏡、精密的成像設(shè)備或復(fù)雜的分析軟件。按照易操作的自動(dòng)化工作流程，把細(xì)胞用SYBR™ Safe核酸染料（Invitrogen S33102）進(jìn)行染色，然后將培養(yǎng)板放在工作站臺(tái)面上進(jìn)行分析。這種方法減少了成本和用戶干預(yù)，同時(shí)提高了可重復(fù)性和通量。

1. 在細(xì)胞檢測(cè)或細(xì)胞培養(yǎng)的自動(dòng)化解決方案中，它是一種測(cè)量細(xì)胞融合度的實(shí)用、經(jīng)濟(jì)高效的工具。

2. 無(wú)需動(dòng)手就可以自動(dòng)選擇合適的時(shí)間點(diǎn)開始細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、傳代或進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。

3. 高度可重復(fù)、標(biāo)準(zhǔn)化和準(zhǔn)確的細(xì)胞融合度測(cè)定方法。

使用Hamilton FLUOREYE自動(dòng)測(cè)量細(xì)胞融合度是傳統(tǒng)顯微鏡成像的一種高性價(jià)比的替代方法，也是哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)追蹤的一種無(wú)人值守、易于整合的臺(tái)面式解決方案。

在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下，在添加了10%FBS（Gibco，A5256801）的高糖DMEM（Gibco,L0101-500）培養(yǎng)基中培養(yǎng)HEK293細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)前一天，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將其接種在黑色96孔板（Greiner CELLSTAR 655090）中。SYBR™ Safe染色和FLUOREYE測(cè)量在Hamilton Microlab STAR平臺(tái)上進(jìn)行。為避免移液過(guò)程中細(xì)胞脫落，每一步操作完成后，孔中都要留出最少50µL的液體。用生長(zhǎng)培養(yǎng)基將50µL SYBR Safe染料稀釋到500倍，然后每孔加入50µL染色液，最終稀釋到1000倍。

FLUOREYE體積小巧，所需空間極小，可輕松集成到現(xiàn)有設(shè)備中，升級(jí)到熒光檢測(cè)解決方案，而無(wú)需昂貴的整合、外罩、運(yùn)輸設(shè)備或?yàn)楸苊馀鲎菜M(jìn)行的編程工作。FLUOREYE具有兩個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)和兩個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)，可進(jìn)行集成的熒光定量，隨后無(wú)需用戶干預(yù)的均一化使之可與目前市場(chǎng)上的許多試劑盒兼容。

用SYBR Safe核酸染料對(duì)HEK293細(xì)胞進(jìn)行染色，然后用FLUOREYE在470nm波長(zhǎng)下測(cè)量熒光強(qiáng)度。每孔強(qiáng)度與BF顯微鏡成像計(jì)算出的融合度相關(guān)?？傮w而言，實(shí)際細(xì)胞融合與FLUOREYE測(cè)量的熒光強(qiáng)度之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性（R2=0.976）。細(xì)胞匯合度和熒光強(qiáng)度之間的線性相關(guān)在10% - 80%之間尤為準(zhǔn)確，而在密度較高時(shí)，差異增大，這可能是由于細(xì)胞壓實(shí)和過(guò)度生長(zhǎng)造成的。此外，F(xiàn)LUOREYE讀數(shù)顯示，細(xì)胞融合度在10 - 80%之間時(shí)，復(fù)孔之間的差異非常?。–V <8%）。