2013年2月17日,第十屆烏普薩拉電子捕獲與電子轉(zhuǎn)移裂解國際會議(UPPCON 2013)在北京友誼賓館召開,由北京生命科學研究所(NIBS)和中科院計算技術(shù)研究所合作承辦。UPPCON 2013是一個偏重質(zhì)譜基礎研究的國際會議,圍繞離子-離子和離子-電子的氣相反應的理論、實驗、儀器開發(fā)和應用,數(shù)位最的的學者介紹他們的研究工作。
會議現(xiàn)場
賽默飛展臺
賽默飛科技ETD技術(shù)發(fā)明人 John E.P.Syka博士
賽默飛ETD技術(shù)發(fā)明人John E.P. Saka博士的報告題目是《Instrumental Approaches to Improving ETD Spectral Quality》,介紹了ETD技術(shù)的進展。
ETD是基于離子/離子氣相化學一種碎裂多肽的新方法,是鑒定蛋白及其翻譯后修飾強有力的工具。ETD通過從陰離子自由基到質(zhì)子肽轉(zhuǎn)移電子的化學能量將肽碎裂,引發(fā)多肽骨干分裂,獲得蛋白質(zhì)翻譯后修飾的重要序列信息。
LTQ Orbitrap 系統(tǒng)結(jié)構(gòu)
傳統(tǒng)的誘導活化裂解(CAD)常用來鑒定蛋白,并試圖確定和找到它們修飾的位點,但CAD技術(shù)有其固有的缺點。與線性離子阱的結(jié)合使用的ETD,可以很容易鑒定用CAD不能鑒定的多肽。
ETD 是由電子捕獲解離ECD 發(fā)展而來,但ECD僅能在的FT ICR 高分辨質(zhì)譜上使用,而ETD 的誕生,可以較為經(jīng)濟的在低分辨離子阱質(zhì)譜上實現(xiàn)同樣的功能。
報告討論了在質(zhì)譜上提高ETD產(chǎn)生離子的數(shù)量的方法。分別從兩個方面,一是進入ETD的離子數(shù)量,一是ETD產(chǎn)生的m/z離子的數(shù)量。
賽默飛應用中心 張偉博士
賽默飛應用中心張偉博士作了題為《Method Development of Typical ETD Experiments for Proteomics Applications》的報告。
張博士認為,ETD的發(fā)展非常迅速,能獲得更豐富的系列碎片。在蛋白質(zhì)組學等領(lǐng)域,ETD與CID是很好的互補,30%蛋白質(zhì)組學的用戶都在使用這個技術(shù)。
ETD產(chǎn)生離子的反應機理
ETD產(chǎn)生離子的反應機理很簡單,當電子轟擊氮氣的時候,會產(chǎn)生一個熱電子,熱電子很容易被捕獲,肽段發(fā)生斷裂反應。相對于傳統(tǒng)的CAD技術(shù),ETD提供了更穩(wěn)定的方法來定性PTMs,鑒定大型多肽或甚至整個蛋白質(zhì)。ETD能夠?qū)⑵胀ǚg后修飾的多肽,或者多個堿性殘基的多肽甚至整個蛋白質(zhì)生成離子。 ETD也可以輕易碎裂含有二硫鍵的的多肽。
ETD中電子轉(zhuǎn)移裂解原理
ETD達到狀態(tài)的途徑
ETD實驗達到的狀態(tài),主要通過四個部分的調(diào)節(jié),一是對ETD源的調(diào)諧和優(yōu)化,二是建立合適的Tune文件,三是建立分析方法,最后是數(shù)據(jù)處理、搜庫軟件。
ETD應用的例子
CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的磷酸化蛋白質(zhì)組的分析。從老鼠睪丸體中取出全蛋白,通過分解后,用IMAC富集,然后數(shù)據(jù)處理就用PD Workflow。通過一系列的數(shù)據(jù)處理之后就得到所有譜圖的鑒定結(jié)果。CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT三種策略也是很好的互補。
CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的互補性
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賽默飛世爾科技(紐約證交所代碼: TMO)是科學服務領(lǐng)域的世界。我們的使命是幫助客戶使世界更健康、更清潔、更安全。公司年銷售額130億美元,員工約39,000人。主要客戶類型包括:醫(yī)藥和生物技術(shù)公司、醫(yī)院和臨床診斷實驗室、大學、科研院所和政府機構(gòu),以及環(huán)境與過程控制行業(yè)。借助于Thermo Scientific、Fisher Scientific和Unity™ Lab Services三個首要品牌,我們將創(chuàng)新技術(shù)、便捷采購方案和實驗室運營管理的整體解決方案相結(jié)合,為客戶、股東和員工創(chuàng)造價值。我們的產(chǎn)品和服務幫助客戶解決在分析領(lǐng)域所遇到的復雜問題與挑戰(zhàn),促進醫(yī)療診斷發(fā)展、提高實驗室生產(chǎn)力。欲了解更多信息,請瀏覽公司網(wǎng)站:
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