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用光照培養(yǎng)箱做種子發(fā)芽測定方法試驗
1．測定樣品的提取用四分法從凈度測定合格的純凈種子，每個三角形中數(shù)取25粒種子組成100粒，共組成四個100粒，即為四次重復(fù)，分別裝入紗布袋中。
2．消毒滅菌為了預(yù)防霉菌感染，干擾檢驗結(jié)果，檢驗所使用的種子和各種物件一般都要經(jīng)過消毒滅菌處理。
(1)檢驗用具的消毒滅菌：發(fā)芽盒、紗布、小鑷子仔細洗凈，并用沸水煮5～10分鐘，供發(fā)芽試驗用的發(fā)芽箱用噴霧器噴灑福爾馬林后密封兩三天然后使用。
(2)種子的消毒滅菌：目前常用的藥劑有福爾馬林、高錳酸鉀。藥劑種類不同，處理的方法和時間也不一致。
福爾馬林：將紗布袋連同其中的種子測定樣品放人小燒杯中。注入0. 15%的福爾馬林溶液以浸沒種子為度，隨即蓋好燒杯。20分鐘取出絞干，置于有蓋的玻璃皿中悶30分鐘，取出后連同紗布用清水沖洗數(shù)次，即可進行浸種處理。
高錳酸鉀：用0.2%～0.5%的高錳酸鉀溶液浸2小時，取出用清水沖洗數(shù)次。
3．浸種多數(shù)藥用植物種子不必浸種處理，但是如落葉松、馬尾松、側(cè)柏、黃連木、胡枝子等，用始溫為45℃水浸種24小時，刺槐種子用80～90℃熱水浸種，待水冷卻后放置24小時，浸種所用的水最好更換1～2次。
4．發(fā)芽床的準備發(fā)芽床是為種子發(fā)芽和發(fā)芽初期幼苗生長發(fā)育提供襯墊的發(fā)芽基質(zhì)。發(fā)芽床種類較多，但標準發(fā)芽實驗主要選用的是紙床和沙床。土壤或其他介質(zhì)不宜用作初次試驗的發(fā)芽床。
紙床多用于中小粒種子的發(fā)芽試驗，要求具有一定的強度、質(zhì)地好、吸水性強、保水性好、無毒無菌、清潔干凈，不含可溶性色素或其他化學(xué)物質(zhì)，pH值為6.0～7.5。
可以用濾紙、吸水紙等作為紙床。
有紙上或紙間兩種置種方式。紙上是將兩層或多層紙放于透明的培養(yǎng)皿，發(fā)芽盤或塑料盒里，然后將種子放在充分濕潤的紙上蓋好蓋子，放入發(fā)芽箱或發(fā)芽室進行發(fā)芽試驗。
紙間方法有蓋紙法和紙巾卷法等幾種使用方法。蓋紙法：先將種子放在兩層濕潤紙上，然后再在上面輕輕蓋上1層濕潤紙；紙巾卷法：先將種子均勻排列在一層或兩層濕潤紙上，在種子上面蓋上1層同樣大小的濕潤紙，然后卷成筒狀，兩端用橡皮筋綁好，放于保濕盒里或塑料袋內(nèi)，平放或立放發(fā)芽。
沙床要求沙粒大小均勻，其直徑為0. 05～0. 80mm。無毒無菌無種子。持水力強，pH為6.0～7.5。使用前必須進行洗滌和高溫消毒。
化學(xué)藥品處理過的種子樣品發(fā)芽所用的沙子，不再重復(fù)使用。
沙床也有沙上或沙中兩種置種方式。沙上是把種子壓入厚2～3cm濕潤沙的表層；沙中則是將種子播在厚2～4cm的濕沙上，再按種子大小覆蓋上一層12cm厚度的濕沙。
注意：發(fā)芽床、培養(yǎng)皿等用具使用前應(yīng)洗凈或消毒。
5．置床將經(jīng)過消毒滅菌、浸種的種子安放到發(fā)芽床上。每個發(fā)芽盒床上整齊地安放1個重復(fù)的種子，種粒之間保持的距離大約相當于種粒本身的1～4倍，以減少霉菌感染，種粒的排放應(yīng)有一定的規(guī)則，此外，要求每粒種子均充分接觸水分，從而使其吸水一致，發(fā)芽整齊。在發(fā)芽盒不易磨損的地方貼上小標簽，寫明送檢樣品號、重復(fù)號、姓名和置床日期，然后將發(fā)芽盒蓋好放入能調(diào)控溫度、光照的光照培養(yǎng)箱內(nèi)。
6．管理經(jīng)常檢查測定樣品及其水分、通氣、溫度、光照條件。發(fā)芽所用溫度執(zhí)行GB2772-1999中的規(guī)定。輕微發(fā)霉的種粒可以揀出用清水沖洗后放回原發(fā)芽床。發(fā)霉種粒較多的要及時更換發(fā)芽床或發(fā)芽容器。
7．觀察記載發(fā)芽測定的情況要定期觀察記載。觀察記載的間隔時間根據(jù)不同藥用植物和樣品情況自行確定，但初次記數(shù)和末次記數(shù)必須有記載。
發(fā)芽測定持續(xù)時間為末次計數(shù)天數(shù)，自置床之日起算，不包括預(yù)處理時間。
記載項目按發(fā)芽床的編號依次記載以下各點
8．計算發(fā)芽率和發(fā)芽勢
發(fā)芽率(%)=(n／N)×100%
式中：n為最終達到的正常發(fā)芽粒數(shù)；N為供試種子數(shù)。
發(fā)芽率按組計算，然后計算四組的算術(shù)平均值。
發(fā)芽勢(%)=(n／N)×100%
式中：n為規(guī)定時間內(nèi)正常發(fā)芽粒數(shù)；N為供試種子數(shù)。