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馬蹄金下胚軸體培養(yǎng)與植物再生都要注意哪些？
150L光照培養(yǎng)箱具有超溫和傳感器異常保護(hù)功能，保障儀器和樣品安全；選配全光譜的植物生長(zhǎng)燈，有利于植物的生長(zhǎng)，提高抗病性。具有掉電記憶、掉電時(shí)間自動(dòng)補(bǔ)償功能；恒溫控制系統(tǒng)，反應(yīng)快，控溫精度高。
材料與方法
試驗(yàn)材料
無(wú)菌苗下胚軸的獲取適量的馬蹄金種子,用自來(lái)水洗凈表面的包衣劑，至露出褐色表皮，再用洗潔精清洗一次后于流水中沖洗10 min,而后轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精消毒30s,再以1 g/L的HgCl,浸泡12 min,最后用無(wú)菌水沖洗3次，接種于MS培養(yǎng)基12)中,置于不同的光照條件下萌芽和生長(zhǎng)。光照系在上海喆圖牌150L光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行,每天光照16 ho培養(yǎng)溫度為(25士1) ℃。
愈傷組織的誘導(dǎo)
種子萌芽5 d后，截取下胚軸靠近子葉端0.5cm長(zhǎng)的小段，接種于添加不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上,在暗處培養(yǎng)，溫度為(25+1)℃。篩選植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合效果較好的一種，再選用不同的基本培養(yǎng)基作試驗(yàn)，截取同樣的下胚軸小段在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
愈傷組織的分化
將愈傷組織轉(zhuǎn)入添加有不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合的B5培養(yǎng)基L13]上培養(yǎng)誘導(dǎo)分化，同樣在上海喆圖牌150L光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行光照,每天光照16 h,培養(yǎng)溫度為(25士1) ℃。2結(jié)果與分析
光照對(duì) 下胚軸生長(zhǎng)的影響
從實(shí)驗(yàn)可以看出，在全部5 d光照條件下下胚軸生長(zhǎng)極為緩慢，而且極短,顏色變綠;在全部黑暗條件下下胚軸生長(zhǎng)快速而鮮，較長(zhǎng)， 呈白色;先經(jīng)3 d黑暗培養(yǎng),然后在2 d光照下培養(yǎng)的下胚軸生長(zhǎng)緩慢而且逐漸變綠，長(zhǎng)度適中。故為了較短時(shí)間內(nèi)能獲得大量下胚軸，宜選擇在暗處培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，而在15培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最快，故B5培養(yǎng)基是一種較好的用于獲得馬蹄金下胚軸愈傷組織的基 本培養(yǎng)基。
討論
同一種基本培養(yǎng)基附加成分對(duì)愈傷組織形成的影響
愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖及形態(tài)建成主要受外植體本身、培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境三大因素的調(diào)控。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)及分化具有十分復(fù)雜而重要的影響，在植物離體培養(yǎng)過(guò)程中，外植體的內(nèi)源激素水平不斷變化,生長(zhǎng)素類(lèi)物質(zhì)存在極性運(yùn)輸現(xiàn)象，由此導(dǎo)致了其體內(nèi)分布的特異性改變,這一變化與器官發(fā)生和愈傷組織的形成密切相關(guān)。培養(yǎng)基中加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)可以改變和影響外植體的內(nèi)源激素水平，同時(shí)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素之間也可能相互影響。馬蹄金下胚軸在附加不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，都可誘導(dǎo)出愈傷組織，出愈率也較高(≥50%)，但植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)影響很大。一般在植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度較低時(shí)，愈傷組織生長(zhǎng)狀況較好，這可能是因?yàn)轳R蹄金內(nèi)源細(xì)胞分裂素濃度較高,高濃度的外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑反而抑制了愈傷組織的生長(zhǎng),從而進(jìn)一步證實(shí)了受傷的植物細(xì)胞所釋放的物質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞分裂具有重要作用。
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