霉菌的復(fù)蘇與傳代
1、無菌操作方式開啟凍干菌種管,加入適量培養(yǎng)液(按菌種選擇培養(yǎng)液,如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基),吹吸數(shù)次,使菌種融化分散。取含 5.0mL~10.0mL相應(yīng)培養(yǎng)液的試管,滴入少許菌種懸液,使用恒溫培養(yǎng)箱在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間(一般為30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h~48h),此為第1代培養(yǎng)物。
2、接種環(huán)取第 1 代培養(yǎng)物,或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠,劃線接種于相應(yīng)培養(yǎng)基平板(按菌種選擇培養(yǎng)基,如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復(fù)合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基),在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間(一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h~24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h~48h),此為第2代培養(yǎng)物。。
3、取第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落,接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面或平板(按菌種選擇培養(yǎng)基斜面,如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復(fù)合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基平板),在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間(一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h~24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h~48h),此為第3 代培養(yǎng)物。
4、取第 3 代培養(yǎng)物,接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面,在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間,此為第4 代培養(yǎng)物。
5、按上述方法培養(yǎng)至所需代數(shù),傳代時(shí)在試管上注明菌種名稱、菌種號(hào)、代數(shù)及傳代日期等基本信息。