黑曲霉菌孢子懸液的制備
1、 挑取第 2 代培養物中典型菌落,接種于麥芽浸膏營養肉湯培養基中,置 30℃±1℃ 恒溫培養箱中培養 42h~48h,即為第 3 代培養物。
2、 用 10.0mL 吸管吸取 5.0mL~10.0mL 第 3 代培養物,接種羅氏瓶,并搖動使菌液布滿 MEA 培養基表面,將多余肉湯培養物液體吸出,置 30℃±1℃恒溫培養箱中培養 42h~48h。
3、 向羅氏瓶培養物中加入 5.0mL~10.0mL 0.05%(V/V)吐溫 80 生理鹽水溶液,刮洗黑曲霉菌分生孢子于溶液中,將孢子懸液移入裝有玻璃珠的三角瓶中,輕輕振搖 1min ,過濾除去菌絲后,顯微鏡下(400 倍)觀察是否仍有菌絲存在,若有可經 5000 r/min~6000 r/min離心 20min。再次在顯微鏡下(400 倍)觀察,必要時重復上述步驟。
4、 黑曲霉菌分生孢子懸液冷藏保存不超過 2d,使用前,混合均勻,在顯微鏡下(400 倍)觀察是否有孢子出芽,若有則不得使用。
5、 將制成的菌懸液,進行活菌培養計數,按其結果用稀釋液稀釋至所需濃度,懸液定量殺滅試驗時,菌懸液濃度為1×107CFU/mL~5×107CFU/mL。