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純化后蛋白質(zhì)的保存
蛋白質(zhì)純化后，大家是如何保存的呢？有沒(méi)有遇到過(guò)不同批次純化的蛋白，采用同樣的測(cè)試方法，活性卻不太一樣？有沒(méi)有遇到過(guò)新純化的蛋白，從低溫培養(yǎng)箱拿出融化后，居然沉淀了？蛋白質(zhì)畢竟是生物體內(nèi)的大分子，提純后如果保存不當(dāng)，會(huì)很容易失活變性。 下面喆圖小編就帶大家聊一聊純化后蛋白的保存問(wèn)題。
原則
保存蛋白質(zhì)應(yīng)該遵循下面這幾個(gè)原則:
1. 低溫
低溫下保存蛋白質(zhì)是極其必要的。低溫意味著更低的能量，低溫下蛋白質(zhì)分子熱運(yùn)動(dòng)較低，其內(nèi)部的成鍵不容易斷裂。另外，在低溫下，微生物不容易生長(zhǎng)，可能存在的蛋白酶的活性也會(huì)很低，這些更容易保證蛋白質(zhì)的活性。
2. 分裝
蛋白質(zhì)有時(shí)候是需要冷凍保存的，但我們使用蛋白質(zhì)時(shí)卻是在室溫或者更高的溫度。凍融這一過(guò)程會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)造成不可逆的損傷。因此我們需要盡量減少凍融的次數(shù)。純化后的蛋白質(zhì)，進(jìn)行分裝保存，每次需要多少便融化多少，保證蛋白質(zhì)樣品只經(jīng)歷一次凍融。
3. 濃縮
純化后的蛋白質(zhì)盡量以高濃度保存，濃度在1mg／ml以上，高濃度更有利于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定。高濃度的另一個(gè)好處是防止蛋白質(zhì)分子黏貼在塑料或玻璃材質(zhì)的管壁上。不要驚訝喲，疏水性蛋白質(zhì)是很容易粘貼在管壁上的。
4. 速凍／速融（Flash freeze）
在蛋白質(zhì)溶液冷凍的過(guò)程中，純水首先結(jié)冰，蛋白質(zhì)分子會(huì)被暴露在*的鹽濃度或pH下，這會(huì)破壞蛋白的活性。因此，需要盡可能縮短冷凍的過(guò)程。速凍可以在液氮中進(jìn)行，也可以在干冰，乙醇和丙酮的混合物中進(jìn)行。速凍后，蛋白質(zhì)可以保存在-20度或-80度的低溫保存箱中。同樣的道理，蛋白質(zhì)融化的過(guò)程也要盡可能的快速，可以在溫水中進(jìn)行。
5. 添加劑
蛋白質(zhì)需要保存在合適的緩沖液中。同時(shí)緩沖液中還可以添加一些保護(hù)劑，比如保存在-20度時(shí)，可以添加10%-50%的甘油，這樣可以防止蛋白質(zhì)冷凍，不需要經(jīng)歷凍融。同時(shí)還可以添加一些抗菌試劑，比如NaN3（sodium azide），可以防止細(xì)菌生長(zhǎng)。或者蛋白酶抑制劑（PMSF），抑制蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的破壞。另外，還可以添加一些還原劑，如DTT，防止蛋白質(zhì)的氧化。在選擇添加劑時(shí)，一定要保證所加試劑不會(huì)影響到蛋白的活性。
保存方法
蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇*取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白。
短期保存（1周內(nèi)）：
對(duì)于短期保存，大多數(shù)蛋白可以保存在4 攝氏度下。4攝氏度下保存面臨MAX大的問(wèn)題是微生物的污染。因此，如果保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí)，建議利用0.22 um的濾膜過(guò)濾樣品，除菌后保存在無(wú)菌的管子中。值得注意的是，并不是所有的蛋白質(zhì)都適合保存在4度下。
長(zhǎng)期保存：
對(duì)于長(zhǎng)期保存，冷凍是必須的。蛋白質(zhì)溶液在速凍后可以在-20度或-80度中進(jìn)行，-80度下的蛋白可以保存更長(zhǎng)久。長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)的另一個(gè)方式是凍干（lyophilization）。蛋白質(zhì)凍干后會(huì)呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式，處于*脫水的狀態(tài)，可以在低溫保存箱中無(wú)限期保存。然而，對(duì)于某些蛋白質(zhì)，凍干操作有一個(gè)潛在問(wèn)題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶。凍干／復(fù)溶的過(guò)程同樣會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用。
注意事項(xiàng)
1. 無(wú)菌
進(jìn)行蛋白質(zhì)操作實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要帶手套。實(shí)驗(yàn)室中戴手套多是為了保護(hù)自己，但在生化實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)卻是需要我們保護(hù)的對(duì)象。我們的皮膚上有一些蛋白酶，這些蛋白酶很可能會(huì)降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學(xué)分子也可能會(huì)污染蛋白樣品。另外，為了防止細(xì)菌的生長(zhǎng)，蛋白質(zhì)建議保存在滅菌的小管中。
2.避免震蕩
震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用。震蕩時(shí)溶液中會(huì)產(chǎn)生氣泡，氧氣的進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸，其極易被氧化為胱氨酸，這一過(guò)程很可能會(huì)破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。