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荸薺皮中總黃酮和荸薺中多糖抗氧化活性研究
首先喆圖小編來(lái)給大家講講荸薺， 又名馬蹄、水栗、芍、鳧茈、烏芋、菩薺、地梨，是莎草科荸薺屬一種屬于多年生淺水性草本植物。我國(guó)荸薺的產(chǎn)量占世界的95%以上，長(zhǎng)江流域以南各省均有大量栽培，是一種重要的水生植物。
荸薺皮作為荸薺加工及食用后的下腳料，占鮮荸薺質(zhì)量的25％左右，資源量很大，然而絕大多數(shù)以廢物的形式丟棄或作為農(nóng)戶肥料，造成環(huán)境污染和資源的極大浪費(fèi)。黃酮是具有酚羥基的一類還原性化合物，在復(fù)雜反應(yīng)體系中，由于其自身被氧化而具有抗氧化作用。凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均稱為多糖。
而在荸薺肉和荸薺皮中含有豐富的多糖類化合物與黃酮類化合物。目前，對(duì)于提取植物中黃酮類化合物的方法有好多種，接下來(lái)為了有效開(kāi)發(fā)和利用荸薺原料、減輕環(huán)保壓力，提供一種簡(jiǎn)單、有效的方法，實(shí)驗(yàn)所需材料如下：
1、購(gòu)買(mǎi)新鮮荸薺，削皮把皮和肉分裝處理好備用。
2、荸薺皮:收集新鮮荸薺, 剔除雜質(zhì)及腐跡, 于鼓風(fēng)干燥箱中80 ℃烘6 h , 再用粉碎機(jī)粉碎備用。
3、荸薺肉：收集新鮮荸薺肉切碎，于鼓風(fēng)干燥箱中烘干，再用粉碎機(jī)粉碎備用。
所需試劑與儀器：
蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、無(wú)水甲醇、苯酚、葡萄糖、濃硫酸、丙酮、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、水楊酸、過(guò)氧化氫、 三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、鄰苯三酚（焦性沒(méi)食子酸）、1,1 - 二苯基-2- 苦基苯肼。蒸餾水、去離子水。 粉碎機(jī)、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、電熱恒溫水浴鍋、鼓風(fēng)干燥箱、25ml比色管、50 mL 容量瓶、100ml容量瓶、移液管、電子天平、超聲清洗器、分光光度計(jì)、10ml試管。
肉中多糖提取： 超聲輔助提取法：蒸餾水（料液比1:25），預(yù)熱10min，超聲20min，超聲功率80W，提取溫度60℃，離心并收集長(zhǎng)層清液，加入95%的乙醇使乙醇含量達(dá)到 70%以上然后靜置沉淀。離心收集沉淀，用無(wú)水甲醇，以除去水分和雜質(zhì)，然后晾干備用。
皮中黃酮提取
乙醇提取法：乙醇60% 超聲提取50min。取荸薺皮20g，料液比1:12 提取溫度60℃離心后收集上層清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后，加水溶解，溶解*后轉(zhuǎn)移至容量瓶中。
實(shí)驗(yàn)方法：溶液含量測(cè)定及溶液配制
樣品溶液含量測(cè)定：分別采用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線法、苯酚-硫酸葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定樣品溶液里面黃酮與多糖的含量。
黃酮溶液：把黃酮溶解液配成25ml一定濃度梯度。(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml）
多糖溶液：配成與黃酮等濃度梯度的多糖溶液。（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml）
實(shí)驗(yàn)操作：
1、 取5支試管加入不同濃度梯度溶液1 mL，再加入3 mL 濃度為0.04 mg/mL的DPPH 溶液，混合均勻，于室溫下避光放置40min，在波長(zhǎng)517 nm 處測(cè)其吸光度為A1；另各取1 mL 2.4.1溶液于試管中，分別加入無(wú)水乙醇3mL，于室溫下避光放置40 min，在波長(zhǎng)517 nm 處測(cè)其吸光度為A2；以3 mL 0.04 mg/mL DPPH 和1mL 無(wú)水乙醇反應(yīng)做為參比，其吸光度記為A0
2、 清除羥基自由基能力測(cè)定 Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基，H2O2/Fe2+體系通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥基自由基 化學(xué)反應(yīng)式如：H2O2+Fe2+ →·OH+OH+ Fe3+ ·OH氧化水楊酸會(huì)產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510nm處有強(qiáng)吸收峰，若體系 9 里面加入清除·OH的活性物質(zhì)，則就減少有色物質(zhì)生成，吸光度值就會(huì)降低，吸光度值越低清除·OH效果就越好。
實(shí)驗(yàn)操作：
1、取6支25ml比色管，并依次編號(hào)，每支比色管各加入9mmol/LFeSO41ml, 9mmol/L水楊酸-乙醇溶液2ml，按試管編號(hào)各加入不同濃度的標(biāo)題2.4.1溶液2ml，后加入8.8mmol/L H2O22ml啟動(dòng)反應(yīng)，用去離子水定容至刻度，于室溫下反應(yīng)1h。以去離子水代替溶液作空白對(duì)照，在510nm處測(cè)定樣品的吸光度，記錄數(shù)據(jù)。
清除超氧陰離子能力測(cè)定 對(duì)超氧陰離子的清除作用，鄰苯三酚自氧化反應(yīng)方法 ：
實(shí)驗(yàn)操作： 取8支洗凈干燥的25 mL比色管依次按照步驟加入
步：編號(hào)后依次加入5 mL 25℃預(yù)熱20min的pH= 8.2濃度為0.05mol/L 的Tris-HCL緩沖液；
第二步：在3-8號(hào)加入5 mL標(biāo)題2.4.1溶液；
第三步：在2-8號(hào)加入2.5mL 在25℃下預(yù)熱20 min濃度為0.5 mmol·L-1 的鄰苯三酚溶液；
第四步：然后用去離子水定容至刻度。
第五步：在波長(zhǎng)為325 nm下每隔30 s測(cè)1次吸光值。以1 號(hào)比色管作為空白。記錄數(shù)據(jù)
以上內(nèi)容為荸薺在食品和藥品領(lǐng)域的有效應(yīng)用提供理論參考，如需了解詳情請(qǐng)聯(lián)系喆圖客服！