質粒（Plasimid），它是一種獨立于宿主染色體（擬核）之外的閉合環狀雙鏈DNA分子。它具有自主復制的能力，能夠在子代細胞中保持恒定的拷貝數，還能夠表達它所攜帶的遺傳信息。此外，質粒載體通常攜帶抗性基因或報告基因，便于篩選和示蹤。這一系列特征使得質粒在基因工程中具有較高的應用價值。質粒載體在基因表達調控中的作用如攜帶調控元件調控基因表達；實現誘導表達；實現基因沉默等等。

圖1：(a)染色體DNA和質粒DNA示意圖；(b)真核細胞表達質粒載體示例。

西安暉瑞可提供的質粒構建服務包括：

過表達質粒構建；

圖2：真核表達人源MAP3K8基因質粒圖譜

（2）誘導基因的定點突變；（單堿基突變，多堿基突變）

（3）構建基因截短體質粒；

圖3：Stat3-full length和Stat3-delete Coiled-coiled domain截短體(紅框為缺失序列）示意圖

（4）亞克隆質粒構建；

圖4：將人源化FOXO1從pFlag-CMV4載體(a)中亞克隆至DOX誘導表達的PLVX-Tetone載體(b)

（5）通過慢病毒介導的基因過表達；

(b)

(c) 

圖5：(a)慢病毒包裝的三質粒系統; (b)Map3k8慢病毒侵染293T細胞24 h熒光圖片; (c)Western blot驗證蛋白表達成功。

（6）通過構建shRNA慢病毒質粒實現基因的敲減；

(b)

(c)

圖6：(a)DSC3-shRNA構建到pGLV3-H1/GFP shRNA慢病毒載體中；(b)DSC3-shRNA慢病毒侵染C2C12細胞24 h明場和熒光圖片；(c)RT-qPCR驗證mRNA水平敲降；(d)Western blot驗證蛋白水平敲降。

（7）通過CRISPR-Cas9技術實現基因敲除。

圖7：(a)將STAT3-sgRNA構建到lenti-CRISPR-V2慢病毒載體中；(b)Western blot驗證蛋白敲除成功。

以上過表達和敲除均可提供**穩定細胞系