胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)zui高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。
胎牛血清使用中常見問題的解答:
1、問:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗(yàn)了。
2、問:胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是 需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,盡量還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?
因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,是不是會影 響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會和病毒相結(jié)合,影響 轉(zhuǎn)染,正確嗎?細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞, 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需 要滅活,滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活 !這要根據(jù)實(shí)際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
5、問:因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,血清滅活時,溫度到了61.7℃,這血清還能用嗎?
答:多長時間???短時間應(yīng)該可以吧,我有一次加熱了一個多小時,還照樣用。
6、問:我滅活胎牛血清時,用的電磁爐,定在了70℃,本來說調(diào)溫度到56℃再放血清的,后來忘了,就把 血清放進(jìn)去了,所以滅活的溫度肯定超過56℃了,不知道這樣對血清 有沒有影響?
答:常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等,其中常用的手法是56℃ 熱處理30分鐘。看看你養(yǎng)的細(xì)胞是什么,一般的話估計(jì)問題不大,要是 很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊。熱滅活目的是 為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì), 在對補(bǔ)體滅活以外,熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作 用。現(xiàn)在好像不主張熱 滅活,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響,對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,此外 ,有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用。
胎牛血清主要用途:
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。