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無血清凍存液的細胞凍存步驟和復蘇步驟

時間:2023/7/24閱讀:1329
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   無血清細胞凍存液通用于各種動物細胞株(腫瘤細胞和常規細胞),凍存細胞可在-80℃長期保存(>5年)。配方成分明確,不含動物來源性蛋白,不含血清,可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。

無血清凍存液

  操作步驟:
  細胞凍存步驟:
  1. 常規方法收集對數期的貼壁細胞或懸浮細胞于試管中。
  2. 根據培養細胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細胞數。
  3. 將所需數目的細胞懸浮液置于離心管中,1000rmp,5分鐘離心收集培養細胞沉淀,*棄去離心管中的上清液。
  4. 加入適量的CELLSAVING?細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度約為5×105-1×107/ml。輕柔地混勻細胞,制成細胞混合液。
  5. 將離心管中的細胞混合液分裝于已標記的凍存管中,建議每管1ml或1.5ml。
  6. 直接將分裝好的細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中,可長期冷凍保存。
  7. 如果想液氮中長期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天時間,方可移至液氮罐中保存。
  凍存細胞復蘇步驟:
  1. 從冰箱中取出凍存的細胞,立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
  2. 待凍存管中細胞混合液*融化后,將其中的混合液移至離心管中,1000rmp,5分鐘離心收集凍存細胞沉淀,移去上清液(操作時 小心,切勿將細胞沉淀移去)。
  3. 加入適量的新鮮細胞培養基,使用移液管緩緩加入到細胞沉淀,輕柔地混勻,將細胞混合液移至事先準備好的培養容器中。
  4. 鏡檢細胞后,可根據各自研究的需要和方法經行細胞常規培養。
  無血清細胞凍存液,含多種保護劑成分。一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量,為多種保護劑組合,在細胞內外進行雙重保護,大大提高了細胞復蘇存活率。無血清細胞凍存液不含牛血清,無動物源組份。2-8℃即可穩定保存,無需冷凍,即取即用。凍存細胞,無需程序降溫。凍存細胞復蘇率在90%以上。
  以上內容僅供參考,希望對您有所幫助!

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