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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1 kit |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CS-20009-50 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,制藥,綜合 |
產品簡介
詳細介紹
一、產品介紹
人中性粒細胞擴增試劑盒是為在體外培養和擴增人中性粒細胞而專門設計的一款含血清培養基套裝。該試劑盒可在21天內誘導人CD34+造血干/前體細胞分化擴增為中性粒細胞，總擴增效率達400-600倍，是研究人中性粒細胞分化、擴增和功能、以及大量產生人中性粒細胞的重要培養系統。
二、產品特點
針對人中性粒細胞的活化和擴增而設計
三、產品成分
產品名稱 | Catlog# | 規格 | 儲存條件 |
人中性粒細胞擴增試劑盒 | CS-20009-50 | 1 kit | |
人中性粒細胞基礎培養基 | CS-20009-B | 50ml | 4℃ |
人中性粒細胞擴增補充因子 | CS-20009-EXS | 0.5ml | -20℃ |
預篩選中性粒細胞專用胎牛血清 | CS-NF-5 | 5ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分
人CD34+細胞磁珠分選試劑
人CD34+造血干/前體細胞擴增試劑盒（東嶺生物，Catalog # CS-20008-50）
四、培養基配制
(在無菌生物安全柜中，開展以下操作)
1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用。
★注：解凍后的補充因子和血清可放置于4oC冰箱，在1個月內使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復凍融！2.擴增培養基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎培養基中，充分混勻，得到人中性粒細胞擴增培養基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎培養基，以此類推。
★注：配好的*培養基請于4oC保存，且于1個月內使用完畢。五、使用說明
請詳細閱讀使用說明后再開始相關實驗。
1.D0：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細胞（參考所使用試劑盒的說明書），計數。
★注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細胞。2.按照人CD34+造血干/前體細胞擴增試劑盒（東嶺生物，Catalog # CS-20008-50）說明書配制人CD34+造血干/前體細胞擴增培養基，重懸細胞，調整細胞密度至2.5*10^4/ml，按照如下表格所示將細胞鋪于培養板：
培養板 | 擴增培養基體積 | CD34+造血干/前體細胞數/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 5*10^3 |
24孔板 | 1.0ml | 2.5*10^4 |
3.將培養板置于細胞培養箱，37℃，5%CO2，靜置培養。
4.D3：半量換液。小心貼培養板側壁用槍尖吸走1/2體積舊培養基，補充加入新鮮人CD34+造血干/前體細胞擴增培養基至初始培養體積（步驟2表格）。
★注：*培養基請恢復至室溫后使用，減少對細胞的刺激5.D6：收集細胞，離心，300g，5分鐘。
6.使用人中性粒細胞擴增*培養基重懸細胞，調整密度至5*10^5/ml，將細胞鋪于合適培養容器中，于細胞培養箱，37℃，5%CO2，靜置培養。
7.D7-D20：按照需求擴增培養人中性粒細胞，傳代時細胞鋪板密度維持在5*10^5/ml，保持培養過程中細胞培養密度低于2*10^6/ml.
8.D20：收集懸浮細胞，即為人中性粒細胞群體，可根據需求開展后續實驗。
★注：擴增過程中，密切關注細胞擴增狀態，如細胞密度過大可能造成細胞狀態不可逆損傷及細胞碎片的增多；D7-D20期間，平均3天傳代一次，可根據細胞具體狀態調整。
六、數據展示
圖：人中性粒細胞擴增培養鑒定。分選人CD34+造血干/前體細胞按照上述說明培養中性粒細胞，不同時間點收集細胞進行總細胞擴增分析，培養第20天時收集懸浮細胞進行表型鑒定及分析。
