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LabFect 原代細胞小核酸轉染試劑

貨號：T1014

存儲條件：4°C保存，超一個月不用于-20°C儲存，避免反復凍融。-20℃保存條件下，有效期為1年。

產品說明：

可用來轉染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp以內的小分子RNA，可轉染絕大多數(shù)原代細胞。目前，無論國外還是國內，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。LabFect 能夠高效轉染絕大多數(shù)原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，LabFect 也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數(shù)原代細胞，LabFect的細胞轉染陽性率都在 80%以上，而轉染細胞死亡率不到 10%。LabFect的使用也極其簡便，先將 sRNA與 LabFect室溫混合，再將 siRNA-LabFect混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞，血清對轉染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。

產品特點：

原代細胞轉染性能：細胞轉染陽性率一般在80%以上，基因敲除效果明顯，肝細胞 Lamin A/C 基因敲除效lv在95%以上；

極低的細胞毒性：轉染細胞死亡率不到 10%，大大降低了因細胞毒性 對實驗結果的影響；

轉染細胞范圍廣，絕大多數(shù)原代細胞都能獲得比較理想的轉染結果。

應用：

siRNA 轉染

miRNA mimics 轉染

200bp內的小分子RNA轉染

操作步驟：

本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。

1. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔500μl培養(yǎng)基，使細胞在轉染時密度在30-50%，盡量不要使用抗生素。

2. siRNA-LabFect混合物準備：

a. 12pmol siRNA用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。

b. 2μl LabFect 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育 5min。注意：確保在25 min內執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲。

c. 孵育5min后，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。

3. 將混合物加到培養(yǎng)的細胞內（wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內，培養(yǎng)孔內含有0.5ml培養(yǎng)的細胞。輕輕晃動培養(yǎng)板，混勻。

b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養(yǎng) 4-6h 時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細胞類型、 所干擾基因本身及分析方法?？稍O置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。

轉染實驗優(yōu)化：為了提高轉染效lv，最好對轉染條件進行優(yōu)化，特別是首ci使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調整siRNA與LabFect試劑的用量。siRNA用量在在 6、12、18、24、30 pmol (final concentration 10-50 nM)之間調整，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調整。

轉染實驗要點：

轉染過程盡量不要使用抗生素，否則會導致細胞死亡增加；

首ci實驗 siRNA 的用量設置在終濃度 10nM、20nM、30nM、40 nM、50 nM 進行摸索 ，后續(xù)實驗根據實驗結果修改。

質量控制

本產品經嚴格的質量檢驗證明，無生物污染

注意：

本產品僅用于科研實驗

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels