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酵母營養缺陷型培養基配制
液體培養基:
8g粉狀培養基LABLEAD系列選擇培養基加950 ml水,常規高壓滅菌后再加50ml 40%過濾除菌的無菌葡萄糖。(備注:YPD、YPDA和YPD plus這三種系列不需要再加糖,直接按瓶子上標簽指示加水配制即可)。配制液體培養基不需要調pH,因為酵母偏好酸性條件生長。如果為了實驗方便,葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌(見下面標準配制法注解)。
固體培養基:
8g粉狀培養基加950 ml, 用NaOH調pH至大致范圍5.8~6.5, 然后按20g/L加瓊脂粉, 高壓滅菌后再加預溫的50ml 40%無菌葡萄糖, 搖勻后傾倒平皿(備注:如不調pH, 瓊脂在酸性條件下會產生崩解)。如果為了實驗方便,葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌。
標準配制法:
標準流程要求葡萄糖過濾除菌,因為葡萄糖與培養基中的氨基酸在高溫高壓下發生化學反應。但有些實驗者為方便起見,將固體葡萄糖按2% 的量(按每升20克)直接加到培養基后一起高壓滅菌,雖然酵母也可以生長,但一般不推薦這種將葡萄糖高壓滅菌的方法。如果實在要圖省事想用這種方法,那么一定要控制好高壓時間在18-20min結束,待壓力下降和溫度降到安全范圍后應盡快取出。否則液體顏色會變成黃色而對酵母特性發生不可預知的影響。但半乳糖和棉子糖不能高壓滅菌,只能用過濾除菌制備,建議制備高濃度40%的儲存液,按計算好的體積加到高壓滅菌的培養基使得終濃度為2%。
說明:
用于組成型表達(如酵母雙雜交、酵母單雜交)以及其它采用組成型啟動子的實驗一般都加葡萄糖;誘導型表達如采用GAL1啟動子載體的表達一般都加半乳糖和棉子糖。葡萄糖可以勉強高壓滅菌,但半乳糖和棉子糖是絕對不能高壓滅菌的, 應采用無菌過濾法先制備40%的無菌儲備液,待不含糖的培養基高壓滅菌后按最終應用濃度為2%的量計算需要加入的無菌液體糖儲存液:
如配制1升培養基則稱取8克培養基加水950 ml,常規高壓滅菌(121°C 20min)完成后待溫度降至安全范圍70°C時趁熱立刻加入50ml 40%過濾除菌的無菌糖,充分混勻。