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High T7 RNA Polymerase
貨號：T0125
儲運條件 ：-20℃
產品組成
組分 | 規格 | 規格 |
High T7 RNA Polymerase(50 U/ul) | 5000 u | 25000 u |
10×T7 RNA Polymerase Buffer | 1.25 ml | 1.25 ml |
產品簡介
本產品是經基因工程改造的熱穩定T7 RNA聚合酶，對噬菌體T7啟動子序列具有高度特異性，跟野生型噬菌體T7 RNA聚合酶相比，它可在更高的溫度下進行反應。High T7 RNA Polymerase可在37~52℃條件下進行高效的體外轉錄。
活性定義
1活性單位(U)是指在50℃ 1 h內使1 nmol ATP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
適用范圍
1. 合成單鏈RNA,包括mRNA,siRNA, gRNA等各類RNA的前體。
2. 合成標記或未標記的高特異性RNA探針。
3. 利用帽子類似物合成加帽的mRNA。
質量控制
蛋白純度檢測
本品經SDS-PAGE檢測純度≥95%。
核酸內切酶殘留檢測
將酶液與超螺旋質粒DNA在37℃溫育4 h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。
DNase 殘留檢測
將酶液與雙鏈DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。
RNase殘留檢測
將酶液與 RNA 在 37℃溫育 1 h，通過電泳檢測 RNA 無降解。
功能檢測
體外轉錄合成實驗，通過 RNA 電泳可以檢測到目的條帶。
試劑 | 體積 | 終濃度 |
10×T7 RNA Polymerase Buffer | 2 μl | 1× |
CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each) | 0.1~0.4 μl each | 0.5~2 mM each |
RNase Inhibitor (40 U/μl) | 0.5~1 μl | 1~2 U/μl |
Template DNA | μg | - |
High T7 RNA Polymerase(50 U/μl) | μl | - |
Nuclease-Free Water | μl | - |
使用方法
推薦反應體系（20 μl）
注:建議加完Nuclease-Free Water，再加CTP/GTP/ATP/UTP。
推薦反應條件
50℃反應 1 h。
反應結束后，可向上述 20μl 反應液中加入1μl dsDNase，37℃孵育15 min用于去除DNA模板。
注意事項
1. 模板 DNA 的純度對體外轉錄反應至關重要。質粒DNA抽提過程中引入的RNase A殘留會顯著影響轉錄RNA的質量，建議使用OD260/280為1.8~2.0的高純度 RNase-free 質粒。
2. 模板DNA可通過線性化環狀質粒或PCR 獲得。模板DNA上游需含有T7啟動子序列，下游為平末端或編碼鏈5' 末端突出。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及口罩進行實驗操作。
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