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血樣的加熱滅活處理可導致生物標志物的錯誤識別
血漿定量核磁共振波譜法(qNMR)已被用于系統地研究樣品收集和制備過程中不同的處理方式對代謝分析結果的影響。
研究人員采用不同大小、不同防腐類型的采血管收集了健康志愿者和新冠病毒感染者的血漿樣本并在一系列的溫度條件下儲存了不同的時長。使用布魯克Avance IVDr,即核磁共振代謝分析系統,利用基于1H-NMR的血漿代謝組學對樣本進行了分析。
樣本制備方法根據布魯克IVDr的標準程序進行,NMR分析由該系統的B.I.Methods 2.0全自動地完成,脂蛋白亞類定量分析由其中的B.I.LISA模塊獲得。
詳細研究了采血管尺寸、防腐劑類型、連續凍融周期、短期和長期樣品儲存溫度以及加熱處理對脂蛋白和代謝物定量結果的影響。
核磁共振數據表明,采血管的選擇對代謝分析結果沒有明顯的影響;血漿樣本可在4°C條件下存放長達48小時再凍存于 -80°C;樣本即使在4°C條件下存放長達168小時,代謝信息的變化仍然很小。
然而,與之相反的是,經過熱處理(56°C,30分鐘,即在沒有高級生物安全設施的實驗室分析血液樣本時,用于滅活新冠病毒的標準程序)的樣本中,代謝物發生了明顯而復雜的變化。
這種在分析前采用的樣本滅活方式,已被證明可降解脂蛋白并差異性地改變代謝信息,即滅活處理對健康受試者和新冠病毒感染者樣本的改變有著顯著的不同。這種差異性的改變意味著,基于滅活血液樣本的代謝分析,可能識別錯誤的生物標志物,而真實的生物標志物卻被遺漏。
因此,從加熱處理的樣本中獲得的新冠肺炎相關的代謝數據在很大程度上是無法解釋的,其研究價值也非常有限。
當前基于核磁共振波譜技術的血漿代謝組學研究,凸顯了生化數據的可靠性如何嚴重取決于樣本采集、樣本制備和分析過程中所遵循的實驗方案是否科學合理。