細菌計數
細菌細胞計數是建立或監測細菌生長速度、確定種群倍增時間所必需的。細菌培
養物可以通過測定活細胞數來確定，活細胞數是每 mL 的菌落形成單位數
(CFU/mL)，或者通過使用分光光度計測量 600 nm 處的光密度（OD600）來間接
分析細胞總數。必須指出的是，細菌的生長速度和培養要求在不同菌種之間可能
有很大的差異，因此很難用同一種方式量化所有的細菌。下面，科博瑞 提供了一
個關于如何確定細菌細胞計數的一般程序。
活體計數：
為了計數細菌懸浮液中的 CFU，從活躍的細菌液體培養物中吸取一定的體積在
適當的液體介質中稀釋。稀釋的程度將取決于菌株的生長速度和階段。為了準確
測定活細胞數，應準備一系列稀釋液和相應的平板。要確定稀釋度，請使用以下
公式：
例如，如果 1.0mL 的原菌液與 9.0mL 的稀釋劑混合，稀釋度是 1/(1+9)或 1/10。
這是 1 到 10 的稀釋度，因為一個體積被稀釋到總共 10 個體積。稀釋度也可以寫
成 1：10，或按指數寫成 10 -1。
在制備稀釋系列之后，每個稀釋液使用涂布平板技術無菌地涂布到幾個平板上，
然后在最佳條件下生長。必須注意的是，培養物的體積也應該被考慮到最終計算
的稀釋度中。例如，如果涂布量為 0.1mL，則被視為 1：10 的稀釋度。這是因為
最終的細胞計數是以每 mL 的 CFU 數來計算的，而 0.1mL 是十分之一毫升。
注意：這個 0.1mL 是 科博瑞實驗室平板計數實驗常用的體積，用的是提前準備
好的平板，不需要給培養基水浴保溫，可以節約操作時間。食品或環境監測請按
照國標里面的體積要求計數
經過一段合適的生長期后，每個平板上生長的菌落數量可以被計數。為了獲得zui
hao的結果，只能使用菌落數在 30-300 之間的平板，因為這將提供細菌濃度的準
確表示。要確定 CFU/mL，請使用以下公式：
稀釋倍數
CFU/mL ? 平均菌落數
具體來說，計算一個稀釋系列的菌落數量的平均值，然后除以平板上的最終稀釋
度。例如，如果在稀釋度為 10 -7時（試管 10 倍系列稀釋到 10 -6，取 0.1mL 涂布
平板計數），從一組平板中獲得三種計數：40、37 和 43，細菌滴度將為
4.0x10 8CFU/mL。
實驗材料
1 細菌的液體培養物
2 移液槍
3 酒精燈
4 系列稀釋液
5 涂布棒
6 固體平板
7 酒精棉球
8 旋渦混勻器
操作步驟
1 如上圖所示給稀釋管和瓊脂平板貼上標簽（標簽很重要，不然容易混淆）。
2 通過小心地旋轉混合物來輕輕地混合培養物懸浮液
3 無菌取出 1.0mL 培養物并將其移入 9mL 的 10-1 稀釋液空白中。旋渦混勻器混
勻，混合 10-1的稀釋液。
4 換用新的無菌槍頭，從 10-1稀釋中取出 1.0mL，轉移到 9mL 的 10-2稀釋管中。
旋渦混勻器混勻。
5 在每根試管子之間使用新的槍頭，繼續連續稀釋到 10-6（也可以根據需要繼續
稀釋）。
6 做完后稀釋系列，回到 10-2稀釋管中。輕輕地旋轉樣品。然后用新槍頭，將 0.1mL
轉移到瓊脂培養皿中，進行平板涂布，做 2-3 個重復。將涂布后的平板放置在適
宜的培養環境中。
7 繼續吸取后續的稀釋系列涂布。在適當的溫度和生長周期下，將每一盤瓊脂倒
置培養。
9 選擇有 30-300 個菌落的培養皿，數一數培養皿上的菌落數。
10 使用菌落計數公式來確定活細胞計數。
注意
這個文檔整理的方法可以較準確且便捷地測定特定條件下培養物的活菌濃度，無
法計數培養物中的死菌濃度，同時也不能直接等同基因的拷貝數。實驗室常規的
定量操作可以參考本文檔，國標食品或環境檢測請按照標準執行。
上?？撇┤鹕锟萍加邢薰?
