上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~
一、樣本制備
1.取樣: 取100μL抗凝血。
2.標記：根據抗體說明書標記實驗管?；靹蚝螅覝乇芄夥跤?/span>15分鐘。
3. 溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。
4. 洗滌：棄去上清，加入1mL 1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。
5. 上機檢測：棄去上清后加入500μL 1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。
二、儀器操作
1. 打開流式細胞儀、開啟液流、質控。
2. 分選前設置：共包含兩個步驟，第一，調節合適的液流斷點，待四路窗口形成清晰的5路液流，其中含4個收集液流，一個廢液流后，利用“sweetspot"鎖住此斷點；然后利用Accudrop 珠子，調整 “Drop Delay"時間，當左側液流接近 100%，而且保持相對穩定的范圍的時間是最佳時間。
3. 設置分析條件：完成質控后，建立用戶文件夾、當日實驗文件夾，根據細胞標記，選擇所需參數，根據各抗原之間生物關系及實驗主要關注點，畫好 FSC-SSC及各熒光參數兩兩相對的散點圖，根據抗原生物關系設置分析門，及群級聯關系表。
4. 確定電壓：先上對照管，根據淋巴細胞在 FSC-SSC散點圖中的位置，調整 FSC和SSC兩個參數的電壓，保證淋巴、單核及中心粒細胞呈現在合適的位置，然后設置P1 門圈住淋巴細胞；根據陰性細胞群位置，調整好其它熒光參數的電壓，記錄10000個細胞。
5. 分類計數：上陽性管，通過分級設門，完成各抗原之間生物關系的呈現，及各細胞分類計數情況。
6. 分選設置：在“sort layout"窗口，設置收集裝置和純度模式，然后設置分選門，圈住CD4或CD8 陽性的細胞，將分選門分別填入左右“sort location field" 框中。
7. 分選：將收集管中分別裝200ul 1XPBS，放入儀器分選倉下面的收集管架上：點“sort"開始分選，此時“sort location field"框中可見所獲得的CD4或CD8陽性的細胞數目；收集到足夠的目的細胞后，停止分選。
8.細胞純度檢測：利用上樣針清洗液和水清洗上樣針，直到以水上樣時，FSC-SSC散點圖中“無點"為止。將分選獲得的CD4陽性細胞上樣回測，觀察細胞分選純度；再次清洗上樣針，將分選獲得CD8陽性細胞上樣回測，觀察細胞分選純度。
通過以上實驗步驟，我們可以成功分選并收集到特定的T細胞群體。
如需流式細胞儀，請聯系天津益元利康生物科技有限公司哦，為你提供高效、高質量的實驗儀器！
益元利康是一家專注于生命科學實驗室快速消耗品為主營方向的生命科技企業，提供完整的產品和服務體系，為廣大的科研用戶提供實驗室一站式服務。益元利康已成為多家生物品牌的代理商，如ALZET、MedKoo、EZB、WaKo、Zymo research、Qiagen等，為用戶提供完善的產品、專業的咨詢，助力推動中國生命科學研究快速發展。
3
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務