凱杰Ni-NTA Agarose試劑是親合層析用基質,用于純化帶有His標簽的重組蛋白。細胞裂解上清液上樣到純化基質上,His-tagged蛋白結合,其他蛋白則流過基質。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
凱杰Ni-NTA Agarose試劑的特點:
一、一步純化就可從細胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
二、高親和力和高結合能力
三、可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
四、預先加載的即用型基質適合任何規模的蛋白純化
五、提供自動純化和檢測的方法
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得Ni-NTA(氨基三乙酸鎳)樹脂。該技術可在天然或變性條件下,從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個鎳離子螯合位點,與鎳的結合能力比其他僅有三個金屬螯合位點的金屬螯合純化方法的結合能力強。多出的一個螯合位點可防止鎳離子脫落,因此具有更強的結合能力,蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術可用于從桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。
His-tagged蛋白的純化包括四個步驟:裂解、結合、洗滌和洗脫。使用QIAexpress 技術純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結構或6xHis標簽。因此可實現在天然或變性條件下,從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白。可使用強變性劑和洗滌劑高效溶解和純化受體、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結合產物的試劑。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值,可洗脫得到純化蛋白。