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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | YLK10365P | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研實驗 | 英文名稱 | Brucella Bovis PCR Kit |
| 保存條件 | 低溫運輸，-20℃保存 | 有效期 | 12個月 |
| 試劑盒說明 | 不同批號的試劑盒組分不可交互使用 |
牛布魯氏桿菌PCR試劑盒
商品名稱：牛布魯氏桿菌PCR試劑盒
Name ：Brucella Bovis PCR Kit
牛布魯氏桿菌（Brucella bovis，又叫Brucella abortus）又叫流產(chǎn)布氏桿菌，是一種革蘭氏陰性的不運動細菌，無莢膜（光滑型有微莢膜），觸酶、氧化酶陽性絕對嗜氧菌，可還原硝酸鹽，細胞內(nèi)寄生，可以在牛體內(nèi)存活，也能引起人類疾病。一頭奶牛如果感染布魯氏桿菌，沒有得到及時的清潔和防疫，布病很快會在牲畜群體里暴發(fā)，進而增加人被感染的幾率。其特點是生殖器官、胎膜及多種器官組織發(fā)炎、壞死和肉芽腫的形成，引起流產(chǎn)、不孕、睪丸及關節(jié)炎等癥狀。感染人后可能導致多個器官或臟器系統(tǒng)，骨骼或關節(jié)的病變，感染組織中可觀察到具有組織學特征的肉芽腫。晚期可能失去勞動能力、臥床不起、出現(xiàn)神經(jīng)或精神病方面的癥狀。因此牛布魯氏菌的檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)PCR原理開發(fā)，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供細菌DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增牛布魯氏桿菌。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（亮黃蓋） |
超純水 | 1 mL（藍色） |
牛布魯氏桿菌PCR引物混合液 | 100 μL（白蓋） |
| 牛布魯氏桿菌PCR陽性對照（1×10E8拷貝/ul） | 50 μL（黃蓋） |
| 核酸釋放劑 | 20次（1ml，綠蓋） |
| 使用手冊 | 1份 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
【自備試劑】
樣品DNA。
【使用方法】
一、樣品DNA的制備
1. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
1. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌DNA提取/試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送20次免DNA提取的核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟。其使用手冊可咨詢本公司客服索取。
二、設置PCR反應（40 μL體系）
2. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
成分 | N+2個 樣品管 | PCR陰性對照 | PCR陽性對照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各20 μL | 20 μL | 20 μL |
牛布魯氏桿菌 PCR引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2個樣品DNA模板 | 各18 μL | - | - |
PCR陰性對照 | - | 18 μL | - |
PCR陽性對照（用牛布魯氏菌PCR陽性對照的10000倍稀釋液） | - | - | 18 μL |
3. 按下表設置PCR反應：
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 94℃ | 5 min |
PCR反應 （35個循環(huán)） | 94℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 60 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
取10-20 μL PCR產(chǎn)物。電泳檢測PCR產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的PCR Mix在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加loading buffer。預期的PCR產(chǎn)物長度為450bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋10倍后重復PCR擴增以排除PCR抑制劑的感染。
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