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E14 小鼠胚胎干細胞

細胞特性：

1） 來源：小鼠，129/Ola品系，胚胎內細胞團

2） 形態：球形克隆 貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

培養基及培養凍存條件準備：

1）準備DMEM 基礎培養基                                 81%      

優質胎牛血清                                                      15 %

GlutaMAX-1谷氨/酰胺                                        1 %

MEM NEAA非必需氨基酸                                    1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉                                      1%

P/S青霉/素-鏈霉/素                                          1%

β-巰基乙醇                                                          0.5 mL（1000X)

LIF                                                                       5μg（10ng/mL）

使用昆明白MEF作為飼養層細胞。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：wan全培養液 60%%，FBS 30%%，DMSO 10%%現用現配。

我庫凍存時，體積為 500 μl，預期存活率 70%，每支凍存管的細胞復蘇，3 至4 天后，會形成 30 至 40 個克隆，建議復蘇至 1 個 T25 培養瓶中。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

E14 小鼠胚胎干細胞

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