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應用領域 | 醫療衛生,環保,生物產業 |
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Nano-Booster 熒光增強劑 熒光增強助推器
讓您的 GFP、RFP、組蛋白和波形蛋白真正發光
熒光蛋白是研究活細胞中蛋白質定位和動力學的有力工具。然而,綠色熒光蛋白(來自水母)和紅色熒光蛋白(來自蘑菇珊瑚)等蛋白質是基因編碼而不是化學工程,繼承了一些普遍的缺點。來自以生理表達水平表達 GFP 或 RFP 融合的細胞的固定樣本的信號強度通常非常低。此外,這些嵌合蛋白的光穩定性和量子效率不足以用于超分辨率顯微鏡(例如 3D-SIM 或 STED)。許多細胞生物學方法,例如用于 BrdU 檢測的 HCl 處理、EdU-Click-iT™ 處理或 FiSH 的熱變性會導致 GFP 或 RFP 信號的中斷。GFP-Boosters 和 RFP-Boosters 非常小,對 GFP 或 RFP 具有高度特異性的結合蛋白,并與 ATTO-TEC 的優質熒光染料共價偶聯。GFP/RFP 結合域源自我們常用的羊駝生產的專有納米抗體。Nanobody-Trap 親和試劑。Nano-Boosters 僅在固定細胞中提供更強和更穩定的融合蛋白信號。GFP-Booster 和 RFP Booster 都與不同且非常有效的染料相連,從綠色到紅色,再到發射的遠紅色。選擇非常適合您學習的那一款。與之前認為的 GFP、RFP、組蛋白和波形蛋白融合蛋白相比,這些品種允許進行更多的生長后分析。
上圖說明了 Nano-Boosters 如何與固定和透化細胞結合。該協議很簡單,結果通常是明確無誤的。
使用 GFP-Booster(左)和 RFP-Booster(右)增強 GFP 和 RFP 信號。使用在 Nano-Booster 處理前后穩定表達核 GFP 或 RFP 融合蛋白的 HeLa 細胞系進行信號強度的比較。在用 Nano-Boosters 處理之前,將細胞固定并透化。
Nano-Boosters 適合我的實驗嗎?
一般來說,與經典的一抗/二抗技術相比,Nano-Boosters 在熒光強度方面的增加相似。Nano-Boosters 解決的常見問題可能是在 GFP 或 RFP 融合體暴露于強激發源時的光漂白校正。但它們解決的問題遠不止這些,僅僅是因為它們體積小。,協議更簡單;您只需要將一個微小分子與您的目標 GFP 融合體結合。這大限度地減少了對結構的干擾并減少了由二抗引起的背景。它還縮短了協議,節省了您的時間。其次,納米助推器可以擠進小地方,這樣 GFP 或 RFP 融合體上難以到達的抗原位點仍然可以很好地結合。第三,由于 Nano-Boosters 與抗體夾心復合物相比非常小,顯微鏡可以具有高分辨率水平,同時仍能提供準確的定位/空間數據。好東西真的是小包裝的!
被稱為駱駝科的動物家族(駱駝、美洲駝和羊駝)產生沒有輕鏈的功能性抗體,即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個可變結構域識別并結合其抗原。當從它們的羧基尾部切下時,這些桶狀結構 (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內的親和力和亞納摩爾范圍內的解離常數(通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍)的特點。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達 70°C 的溫度下極為穩定,即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發揮作用。這些小而強大的抗體片段可用于各種*的應用。他們將打開您的研究可能性。
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