一種跟蹤活細胞中細胞周期動態的非侵入性方法

用于檢測活細胞中 PCNA 的新工具 Cell Cycle Chromobody 可讓您實時監測細胞周期。Chromobody 的小尺寸產生了高信噪比，令人驚嘆的高分辨率圖像或延時電影清楚地顯示了活躍分裂細胞核內復制位點的點狀模式。只需使用 Cell Cycle Chromobody 質粒轉染您選擇的細胞系。該質粒包含與 TagRFP (Evrogen) 融合的 PCNA 特異性羊駝抗體序列。大家都知道，PCNA 是一種支架蛋白，可幫助將 DNA 加工酶錨定和募集到整個染色質的適當位點。轉化后，您的細胞將表達細胞周期染色體。瞬時結合不影響細胞活力或細胞周期各個階段的進展，

U2OS細胞系穩定表達與紅色熒光蛋白TagRFP融合的細胞周期染色體

上面的面板顯示了細胞周期 Chromobody-TagGFP2 [不再可用] 如何在 36 小時的時間過程中清楚地跟蹤細胞，其中它經歷了 2 輪分裂。次分裂后，子細胞在 10 小時左右進入 S 期，顯示出 PCNA 的特征點狀模式。29 小時標記顯示其中一個子細胞進入有絲分裂（前中期），第二個在第 30 小時緊隨其后。對于活細胞成像，將細胞接種在 ibidi µ 載玻片中。在配備 63x/1.4 NA Plan-Apochromat 油浸物鏡和加濕、溫度和 CO2 控制的活細胞室的旋轉圓盤顯微鏡（UltraVIEW VoX，PerkinElmer）上獲取時間序列。TagGFP2 被 488 nm 激光線激發，通常在 100-500 毫秒/圖像之間，激光強度設置為大值。25%。每 30 分鐘以 1000×1000 像素的幀大小、100 nm 的像素大小和 400 nm 的 z 步長大小記錄活細胞的共聚焦圖像 z 堆棧。顯示的圖像是幾個中 z 截面的大強度投影。

染色體將你的細胞變成免疫報告工廠

納米抗體是*的小抗體片段，可與靶蛋白非常有效地結合。在動物細胞中表達的納

米抗體可以被收集并用于體外研究。當納米抗體被表達為與 GFP 等報告分子的融合體

時，發生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細胞內的目標結合。此外，使用正確的載體和啟動子，結合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質融合提供了一個很好的替代方案，用于免疫定位研究。為什么？因為 GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變融合蛋白的活性。相比之下，

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產生沒有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個可變結構域識別并結合其抗原。當從它們的羧基尾部切下時，這些桶狀結構 (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內的親和力和亞納摩爾范圍內的解離常數（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達 70°C 的溫度下極為穩定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發揮作用。這些小而強大的抗體片段可用于各種*的應用。他們將打開您的研究可能性。