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兔IgG只有一種亞型
人和小鼠都有五種抗體類型(IgA,IgD,IgE,IgG,and IgM)。目前為止,已經在兔中發現其中的四種(IgA,IgE,IgG,and IgM)。有趣的是,人有兩種IgA亞型,小鼠有一種,而兔子共有14種IgA亞型。
研究用的抗體主要是IgG類型。兔只有一種IgG亞型,而小鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c和IgG3亞型,大鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c亞型。表一列出了兔抗體類型,亞型,基因名稱及導向NCBI和IMGT基因數據庫的鏈接。
表一:兔抗體類型、亞型及相應基因
抗體類型 | 亞型 | NCBI登錄號 | IMGT 基因名 |
---|---|---|---|
IgA | IgA1, IgA2, IgA3, IgA4, IgA5, IgA6, IgA7, IgA8, IgA9, IgA10, IgA11, IgA12, IgA13, IgA14 | 只以IgA1為例說明。 X51647 | IGHA |
IgE | AY386696 | IGHE | |
IgG | L29172 | IGHG | |
IgM | J00666 | IGHM |
兔抗體分子量
不同類型及不同亞型的抗體具有不同的分子量,因為1)鏈間二硫鍵的數目不同,2)鏈間二硫鍵引起的免疫球蛋白分子的寡聚化程度不同;3)重鏈區的免疫球蛋白域的數目不同。
常見的兔IgG型的在非還原條件下分子量為150KD,含有兩個重鏈(各約50KD)和兩個輕鏈(各約25KD)。在還原條件下,重鏈和輕鏈的分子量分別為50和25KD。
兔抗體的制備
兔多克隆抗體的制備
兔是多克隆抗體中主要的動物宿主,因為兔子個頭小,繁殖周期短,與大部分研究用模式生物有較大的種間距,以及有非常成熟的抗體制備工藝。截止2014年12月10日,Labome抗體庫匯集的308060兔多克隆抗體,分別靶向18302個人基因,13199個小鼠基因,及10923個大鼠基因。
在抗體供應商中非常普遍(即,不同的供應商為同樣的抗體試劑使用不同的產品目錄號)。來邦網是一家努力減少重塑品牌的抗體試劑數量的平臺。
兔單克隆抗體的制備
在過去的幾十年里,人們一直在努力制備兔單克隆抗體。對于在嚙齒動物中沒有免疫原性的抗原來說,這種方法是特別重要的。最初是通過c-myc和v-abl的轉基因兔子產生漿細胞瘤細胞系,進而得到兔單克隆抗體。目前一些公司主要是利用專用技術生產兔單抗。截止2012年12月10日, Labome抗體庫匯集的18692兔單克隆抗體, 分別靶向3112個人基因, 2149個小鼠基因, 及1814個大鼠基因。
兔單抗和小鼠單抗的優劣對比
已有數個研究來比較兔單抗(RabMAb)和小鼠單抗的特點。2005年, Sabrina Rossi等發表了一組比較研究,以多種腫瘤組織和正常組織為實驗材料,檢測常規的免疫組化診斷中雌激素受體, 孕激素受體, Ki-67, cyclin D1, CD3, CD5, CD23, 和synaptophysin的兔單抗和小鼠單抗的染色情況。結果表明,和小鼠單抗相比,兔單抗具有相似的特異性,且具有較高的靈敏度,這允許兔單抗有較高的稀釋比(平均5到10倍);此外,一些情況下,為了達到更好的染色效果,也不需要抗原修復操作 。2008年,Rafael Rocha et al.的研究也支持這一結論 。但是,Jose G. Vilches-Moure 和 Jose A. Ramos-Vara 以甲醛固定,石蠟包埋的犬組織為實驗材料,發現兔單抗和小鼠單抗都識別COX-2, Ki67, synaptophysin, 和vimentin;但是,只有兔單抗能檢測出CD3, chromogranin A, 和孕激素受體, 而只有小鼠單抗能檢測出CD79a, calcitonin, 和雌激素受體。
抗兔的二抗
Labome的調查 二抗表明,山羊、綿羊和驢都是制備抗兔二抗的常用宿主。
抗兔基因的抗體
雖不像嚙齒動物那樣常用,兔也是一種非常有研究價值的動物。兔子是研究腫瘤發生, 損傷和創傷修復, 及其它一些應用的很好的模式生物。
兔網織紅細胞裂解液常用于體外無細胞翻譯體系 。截止2012年12月10日,Labome抗體庫匯集了靶向38個兔基因的單抗,36個兔基因的多抗。
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