一、組織塊直接培養法
1、取材，用 Hank's 液洗滌三次，并剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
2、用手術剪將組織剪切成 1mm3左右的小塊，再用 Hank's 液洗三次。
3、將組織塊轉移至培養瓶，并貼附于瓶底面。
4、輕輕將培養瓶翻轉，瓶底朝上，向瓶內注入適量的培養液，將培養瓶放置在
37℃恒溫箱內培養。
5、放置待組織小塊貼附后，將培養瓶慢慢翻轉平放，使組織浸入培養液中（勿

使組織漂起），37℃繼續培養。

二、消化培養法
1、取材，用 Hank's 液洗滌三次，并剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
2、用手術剪將組織剪切成 1mm3 左右的小塊，再用 Hank's 液洗三次。
3、視組織塊量加入酶液，37℃中消化 20—40 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次，或用
吸管吹打一次，使細胞分離。
4、加入 3—5ml 培養液以終止酶消化作用（或加入相關酶抑制劑）。
5、靜置 5—10 分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
6、1000rpm，離心 10 分鐘，棄上清液。
7、加入 Hank's 液 5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
8、加入培養液 1—2ml（視細胞量），血球計數板計數。

9、將細胞轉移到培養瓶中，37℃下培養。

三、 器官培養
1、將不銹網做成支架形狀，調整其高度至培養皿的 1/2 深度平面，在其表面放
置 0.5μm 孔徑濾膜。
2、將培養液加入培養皿中，使液面剛剛接觸到濾膜，但不要使其浮起。
3、將要培養器官組織放在濾膜上，一般厚度不要超過 200μm，水平面積不超過
10mm2。
4、將上述準備好的培養物放入 CO2培養箱，并加注氧氣調整氧分壓，最好到 90%。
5、培養過程中要注意觀察培養液平面，盡可能保持在與濾膜一致的水平上。
6、上述可進行器官培養 1-3 周，每 2-3 天換液一次，并根據情況做進一步實驗
和檢測。