細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1801

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時(shí)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal)活性水平上調(diào)而對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè)的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測(cè)，也可以用于冰凍切片的衰老檢測(cè)。

絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老(senescence)狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。衰老的細(xì)胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，并且衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制的情況。衰老細(xì)胞通常體積變大，并表達(dá)在pH6.0時(shí)有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。細(xì)胞衰老也被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

尚寶生物生產(chǎn)的細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本產(chǎn)品染色的染色效果請(qǐng)參考圖1。

圖1. 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒用于MCF-7細(xì)胞的染色效果圖

圖A是正常的MCF-7細(xì)胞，圖B是MCF-7細(xì)胞用Etoposide處理誘導(dǎo)的衰老組。實(shí)際染色效果會(huì)因樣品及實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，不會(huì)染色衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞。

主要特點(diǎn)：本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，能兼容普通的細(xì)胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質(zhì)的耗材、容器或玻璃容器進(jìn)行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質(zhì)的容器或耗材，否則可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實(shí)驗(yàn)觀察。即使嚴(yán)格按照要求操作，也會(huì)在染色時(shí)間比較長(zhǎng)的情況下，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經(jīng)過多方面的優(yōu)化，對(duì)耗材或容器的材質(zhì)無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會(huì)產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷。

國(guó)際同類試劑盒  尚寶生物試劑盒

圖2. 本試劑盒優(yōu)化前后的對(duì)比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管、多孔板等會(huì)產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測(cè)，足夠測(cè)定100個(gè)樣品；使用24孔板測(cè)定，足夠測(cè)定400個(gè)樣品；使用96孔板測(cè)定，足夠測(cè)定1000個(gè)樣品。對(duì)于組織切片或組織塊，可以檢測(cè)的樣品數(shù)量視樣品的大小而定。對(duì)于普通切片的滴染足夠檢測(cè)100個(gè)樣品。

產(chǎn)品組成：

使用說明：

1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：

a. 對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

b. 吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

e. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：

a. 離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng)，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。

b. 離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

e. 取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

3. 對(duì)于組織切片：

a. 對(duì)于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理。對(duì)于冷凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行。

b. 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。

c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。

d. 吸除PBS，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

e. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

f. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

注意事項(xiàng)：

1. 加入染色工作液后，由于溶液蒸發(fā)或其它未知原因等因素，可能會(huì)有結(jié)晶形成而影響觀察和拍攝照片，此時(shí)建議吸除染色工作液，加入適量70%乙醇進(jìn)行洗滌，70%乙醇可在短時(shí)間內(nèi)溶解結(jié)晶，待結(jié)晶溶解消失后再更換成PBS或生理鹽水。70%乙醇的洗滌對(duì)染色效果沒有任何影響。

2. 在石蠟包埋的過程中，溫度、固定液等因素可能會(huì)導(dǎo)致β-半乳糖苷酶失活，從而造成染色失敗，因此本試劑盒不建議用于石蠟切片的衰老檢測(cè)。如果一定要用于石蠟切片的檢測(cè)，建議自行對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行一定的優(yōu)化。

3. β-半乳糖苷酶染色固定液對(duì)人體有毒、有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)?zhí)貏e小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

4. X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會(huì)凍結(jié)，室溫或37℃水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動(dòng)即可*融解。

5. 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會(huì)影響染色工作液的pH值，而導(dǎo)致染色失敗。

6. 試劑解凍后或使用前如果有沉淀，必須在使用前確保沉淀全部溶解。β-半乳糖苷酶染色液B剛從試劑盒中取出時(shí)，管底可能存在少量沉淀，屬正常現(xiàn)象，充分混勻或Vortex后，沉淀會(huì)全部溶解，并須確保在全部溶解后使用。配制染色工作液時(shí)，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會(huì)*溶解，且須確保全部溶解后才能使用。

7. 使用96孔板等多孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果孵育過夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)"(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中明顯的是四周細(xì)胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng)。邊緣效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻、細(xì)胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不一致、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過長(zhǎng)時(shí)間，以避免蒸發(fā)等帶來的邊緣效應(yīng)；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，實(shí)驗(yàn)樣品最好進(jìn)行隨機(jī)分配，不要將某一組樣品固定放在某個(gè)位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。

8. 需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。

9. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

10. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：-20oC保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。