漆酶活性檢測試劑盒（可見分光光度法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1256

產品規格：50管/48樣

產品簡介：

漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一種環保型酶，其*的催化性質在生物檢測中有廣泛的應用。

漆酶分解底物ABTS產生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

產品內容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×2瓶，4℃避光保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水，水浴鍋。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

（1）組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

（2）細胞：按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

（3）培養液：直接檢測。

二、測定步驟：

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長至420nm，蒸餾水調零。

2、 水浴鍋溫度調至45℃。

3、 工作液的配制：一瓶試劑二用25mL試劑一溶解。現用現配。

4、 操作表：在1mL玻璃比色皿中分別加入下列試劑：

三、漆酶活計算：

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活（U/mg prot）=△A÷ε÷d×V反總×10⁹÷（V樣×Cpr）÷T= 61.7×△A÷Cpr

（2）按樣本質量計算

酶活定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活（U/g 鮮重）=△A÷ε÷d×V反總×10⁹÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 61.7×△A÷W

（3）按細胞數量計算

酶活定義：每10⁴個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活（U/10⁴ cell）=△A÷ε÷d×V反總×10⁹÷（V樣×500÷V樣總）÷T= 0.123×△A

（4）按液體體積計算

酶活定義：每mL液體每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。

漆酶酶活（U/mL）=△A÷ε÷d×V反總×10⁹÷V樣÷T= 61.7×△A

ε：ABTS 摩爾消光系數：36000L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.001L；V樣：反應中樣本體積，0.15mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測定；W，樣本質量，g；T：反應時間，3min。

注意事項：

1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。

2、測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請將樣品用提取液進行適當的稀釋再測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

3、空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，OD值變化不超過0.05。