維生素B2檢測試劑盒（熒光光度法）

產品貨號：BA1717

產品規格：50T

產品簡介：

維生素B2 (Vitamin B2 )又稱核黃素，是一種異咯嗪衍生物，耐熱、微溶于水，中性水溶液及乙醇溶液呈黃色，具有很強的熒光，在pH6~7的溶液中熒光*，在pH=11時熒光消失。核黃素可被還原性物質還原為無色的二氫化物，同時失去熒光，二氫化物在空氣中易重新氧化，恢復其熒光。

尚寶維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)是利用Vitamin B2水溶液在激發波長440~500nm(多為460nm)，發射波長范圍約為510~550nm(多為520nm)，當加入有還原性的亞硫酸鹽時，核黃素被還原為無熒光的物質，根據稀核黃素溶液熒光強度的變化即可定量檢測Vitamin B2的含量。本試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        待測樣品如青菜、水果、牛奶等

2.        蒸餾水

3.        勻漿器

4.        稀鹽酸或稀氫氧化鈉

5.        離心管或試管

6.        熒光光度計

操作步驟 (僅供參考) ：

1.        稀釋組織勻漿液：取適量的組織勻漿液(10×)，按組織勻漿液(10×)：蒸餾水=1：9的比例稀釋，獲得1×組織勻漿液，待用。

2.        樣品準備：

A）固體樣品：取待測材料如青菜、水果、松針等，清洗擦干，準確稱量5g置于研磨器內研磨，加入少量1×組織勻漿液，研磨碎，留取上清，再次用1×組織勻漿液研磨，最后一并倒入50ml離心管，補充1×組織勻漿液至50ml，用氫氧化鈉或鹽酸調節pH值至4.5(如無條件可用pH試紙粗略測定)，充分混勻后4000g離心5min或者過濾，上清或濾液定容至50ml，濾液4℃保存備用。

B）液體樣品：牛奶、飲料等液體樣品，取10ml牛奶于100ml燒杯中，加入0.1mol/L的稀鹽酸50ml，放入滅菌鍋中處理30min，冷卻后用稀氫氧化鈉調pH至6，再用稀鹽酸調pH至4.5，沉淀雜質，過濾后將濾液轉移至100ml容量瓶中定容，濾液4℃保存備用。

3.        稀釋標準品：取適量的Vitamin B2標準(100μg/ml)，按Vitamin B2標準(100μg/ml)：1×組織勻漿液=1：9稀釋成Vitamin B2標準(10μg/ml)，4℃保存。注意：Vitamin B2標準(100μg/ml)需要充分溶解混勻，否則會導致標準值不準確。

4.        制備亞硫酸鹽工作液：取一支亞硫酸鹽100mg粉末，充分溶解于2ml蒸餾水，即配制成50mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用。

5.        Vitamin B2檢測：選用恰當的濾色片，測定的激發波長為460nm，發射波長為520nm。提前預熱儀器30min，蒸餾水調零，以下表6號管的Vitamin B2標準(2.5μg/ml)作為參比溶液調熒光光度計的熒光強度讀數滿刻度(100%)，分別測定其他標準溶液和待測樣品的相對熒光強度，如果熒光強度大于100%，需要稀釋后再行測定。分別測定加入亞硫酸鹽工作液前后的熒光值，記為F₀和F_T 。加入亞硫酸鹽后，應充分混勻，及時檢測。

Vitamin B 2 檢測標準曲線繪制及待測樣品操作表

計算：

溶液的熒光強度校準值：F= F₀ -F_T

式中：F=校正后的熒光強度

F₀=還原前熒光強度

F_T=還原后熒光強度

以各管Vitamin B2標準的濃度(μg/ml)或含量(μg)為橫坐標，以對應的校正后的熒光強度(F)為縱坐標，做出Vitamin B2標準曲線。

根據 Vitamin B2標準曲線及樣品管的校正后的熒光強度 (F)即可計算出待測樣品中Vitamin B2的實際濃度和含量。

100ml液體樣品中VitaminB2含量(μg/100ml)= C×V₂ ×100/V₁

100g固體樣品中Vitamin B2含量(μg/100g)=C×V₃ ×100/m

式中：C=待測樣品中Vitamin B2的濃度(μg/ml)

V₁ =檢測體系中加入的濾液體積(ml)=5

V₂ =液體樣本濾液的總體積(ml)=100

V₃ =固體樣品的上清液總體積(ml)=50

m=固體樣品的質量(g)=5

注意事項：

1.        在上述操作中，要嚴格避免VitaminB2受到陽光直射，否則易分解。

2.        待測樣品如不能及時測定，應置于2~8℃避光保存，3天內穩定。

3.        含核黃素的標準品或樣品一旦加入亞硫酸鹽后會因產生二氫化物失去熒光，但二氫化物在空氣中又易重新氧化，恢復熒光，因此應在10min內檢測完畢，而且越快越好。

4.        如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。

有效期：6個月有效。4℃運輸，4℃保存。