硝酸還原酶（NR）檢測試劑盒（萘胺比色法）

產品貨號：BA1739

產品規(guī)格：50T/100T

產品簡介：

硝酸還原酶(Nitratereductase，NR)是一種氧化還原酶，可分為參與硝酸鹽同化的同化型還原酶和催化以硝酸鹽為活體氧化的最終電子受休的硝酸鹽呼吸異化型(呼吸型)還原酶。硝酸還原酶是植物氮素代謝中氮素同化的關鍵酶，該酶與作物吸收利用氮肥有關，對作物的產量和質量有影響，因此可以把硝酸還原酶的活力當作營養(yǎng)診斷養(yǎng)、農田施肥或作物育種的生理生化指標。

尚寶硝酸還原酶(NR)檢測試劑盒(萘胺比色法)檢測原理是NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，其反應如下：

NO₃^-+NADH+H⁺→NO₂^-+NAD⁺+H₂O

產生的亞硝酸鹽與磺胺、萘胺在酸性條件下定量生成穩(wěn)定的紅色偶氮化合物，于分光光度計檢測吸光度，以吸光度變化所需萘胺進行計算。該試劑盒主要用于檢測植物樣本、血清等中硝酸還原酶活性，尤其適用于植物體內硝酸還原酶的活力。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        離心管或試管

3.        勻漿器或研缽

4.        恒溫箱和水浴鍋

5.        低溫離心機

6.        比色杯

7.        分光光度計

操作步驟：

1.        準備樣品：

①植物樣品：取植物組織(根系)清洗干凈，切碎，置于冰箱。按植物組織：NR Lysis buffer比例，加入預冷的NR Lysis buffer，冰浴情況下充分勻漿或研磨。離心，留取上清液即為硝酸還原酶粗提液，4℃保存待用。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，凍存，用于硝酸還原酶的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的硝酸還原酶，可以使用NR Lysis buffer進行恰當的稀釋。

2.        稀釋系列亞硝態(tài)氮標準：取適量的亞硝態(tài)氮標準(100μg/ml)，按亞硝態(tài)氮標準(100μg/ml)：蒸餾水比例混合，即獲得亞硝態(tài)氮標準(1μg/ml)，然后按下表進行稀釋：

3.        NADH工作液：取NADH，恢復至室溫，*溶解于NR Assay buffer，即得NADH工作液。預冷備用，-20℃保存1周有效。注意：該試劑盒多送1支NADH備用。

4.        加樣：按照下表設置空白管、對照管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行管，求平均值。

5.        繪制亞硝態(tài)氮標準曲線：比色杯光徑1.0cm，以空白管調零，以分光光度計測定系列標準管(1-6號)吸光度。以1-6號亞硝態(tài)氮含量(μg)為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制亞硝態(tài)氮標準曲線。

6.        測定酶粗提液：對照管、測定管顯色后，離心，取上清液待用。比色杯光徑1.0cm，以對照管調零，以分光光度計測定測定管吸光度。

計算：

以亞硝態(tài)氮含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制亞硝態(tài)氮標準曲線，根據亞硝態(tài)氮含量與吸光度關系直接計算回歸方程，根據回歸方程計算出反應體系中亞硝態(tài)氮含量。

按下公式計算樣品中的NR活性：

NR(μg/g·h)=X×V₁/(W×t×V₂）

式中：X =根據標準曲線計算出酶粗提液中亞硝態(tài)氮含量(μg)

V₁ =提取酶液時加入的緩沖液體積(ml)=4

W=植物新鮮重量(g)

t=孵育時間（h）=0.5

V₂=加樣時加入的提取液體積（ml）=0.2

注意事項：

1.        硝酸還原酶容易失活，提取和測定時均應操作迅速，盡量在4℃操作。

2.        如果測定植物樣本，取樣最好在晴天進行，最好提前一天施些硝態(tài)氮肥，取樣部位應一致。

3.        加入NADH工作液后，應在避光條件下進行，以防亞硝酸鹽還原為氨。

4.        顯色和比色時間應一致，顯色時間過長或過短對顏色都有影響。

5.        如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應注意酶標板每孔最大體積。

6.        為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：6個月有效。