4CN顯色試劑盒（HRP顯色）

產品貨號：T15230

產品規格：100ml/500ml

產品簡介：

4CN是4-氯-1-萘酚的縮寫，屬于辣根過氧化物酶(HRP)發色系統，與DAB、TMB顯色原理類似。

4CN顯色試劑盒(HRP發色)其顯色原理是4CN與氧化物形成紫色沉淀，可以用于細胞或組織在免疫組化或原位雜交時結合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。

產品組成：

自備材料：

1. 洗滌液

2. 蒸餾水

操作步驟（僅供參考）：

1. 常規組織切片、細胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌。對于檢測內源性辣根過氧化物酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也可用洗滌液洗滌。

2. 按4CN顯色液：4CN氧化劑=比例混合,即為4CN顯色工作液，即配即用。

3. 洗滌過組織后，去除洗滌液，加入適量4CN顯色工作液，確保覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育30min或更長時間，直至顯色至預期深淺。

5. 去除4CN顯色工作液，用蒸餾水清洗即可終止顯色反應。

6. 對組織切片或細胞樣品，反應終止后，如有必要可用中性紅染色液染色，便于觀察。對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項：

1. 4CN氧化劑易揮發，應密閉保存。

2. 顯色后易褪色，請注意避光，以減少染料分解。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題及可能原因：

1. 背景顯色太深

①在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當的封閉液進行封閉，例如選購適當的封閉液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。也應請注意選購經過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進行含內源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內源性過氧化氫酶。可以在4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗濃度。

④選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

2. 沒有顯色或顯色太弱

①當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

③適當延長顯色時間，另外確定抗原修復是否對于使用的一抗是必需的。

有效期：6個月有效。