紫外法蛋白定量試劑盒

產品貨號：15228

產品規格：250T/500T

產品簡介：

蛋白質分子中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白質在270～290nm波長范圍內具有吸收紫外光的性質，其中酪氨酸的最大吸收峰為275nm，色氨酸的最大吸收峰為280nm，苯丙氨酸的最大吸收峰為

257nm。在上述波長范圍內，蛋白質溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測定。

尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優點是：操作迅速、簡便，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點是與標準蛋白中

酪氨酸、色氨酸含量差異較大的蛋白質，準確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結果。

產品組成：

自備材料：

1. 分光光度計或酶標儀

2. 96孔板或離心管

操作步驟( 僅供參考) ：

1. 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×，即為蛋白稀釋工作液。取1支20mg的蛋白標準，加入20ml蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標準(1mg/ml)，-20℃保存。

2. 標準曲線法：取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿，在280nm處以第1管作為調零點，分別檢測各管吸光度，以A280為縱坐標，以蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A₂₈₀。

根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

3. Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對于含有核酸的蛋白質，無需制作標準曲線。以蛋白稀釋工作液作為調零點，取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A₂₈₀和A₂₆₀。根據經驗公式計算出待測樣品的蛋白濃度，如果蛋白濃度過高應用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。

蛋白質濃度(g/L)=1.45×A₂₈₀ -0.74× A₂₈₀

4. Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對于蛋白質含量較少的溶液，適用于該法。取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調零點，取1ml蛋白標準(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A₂₁₅和A₂₂₅。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A₂₁₅-A₂₂₅)為縱坐標，以蛋白濃度為橫坐標，繪制標準曲線，再測出未知樣品的吸收差，即可由標準曲線查出未知樣品的蛋白質濃度。或者不用制作標準曲線，直接按照如下經驗公式計算：

蛋白質濃度(g/L)=144×(A₂₁₅-A₂₂₅)。

注意事項：

1. 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑，不影響后續檢測，該蛋白標準液-20℃保存。

2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。

3. 如果沒有分光光度計，也可以使用酶標儀測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。