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實驗步驟
1.石蠟切片免疫組化:

①67°C烘箱烘片2小時,常規脫蠟至水用pH 7.4的PBS)沖洗E次。每次3 min ;②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩)沖液中中檔微波處理10 min，蒸餾水沖洗三E次。PBS沖洗 E次每次3 min;③)3%H202室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性, PBS)沖洗三次,每次3 min ;④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉.室溫孵育10 min ,吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗。37°C孵育1-2 h或者4°C孵育過夜;⑤PBS沖洗三次每次3 min滴加稀釋至適當比例的帶標記:二抗379C孵育10~30 min，PBS沖洗三次每次3 min ;⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液379C孵育10-30 min, PBS沖洗三E次。每次3 min;⑦顯色劑顯色自來水充分沖洗，復染細胞核酒精脫水二甲苯透明、中性樹膠封固。

2冰凍切片免疫組化:
①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片厚度為5~6 um;
②載玻片可不打底裱片后立刻用電吹風吹干;
③染色前需用冷*酮4°c固定10-20 min:
④PBS洗2次,每次5 min;.
⑤)39%H202滅活內源性過氧化物酶20 min，需遍光處理;
⑥后續血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似后脫水透明封片進行觀察。