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細胞爬片的制備是免疫細胞化學、免疫熒光、TUNEL凋亡檢測的重要一步。
細胞爬片的制備
(1)如果使用載玻片或蓋玻片,必須在使用之前滅菌。可以一-次滅菌并貯存在無菌狀態下。如果使用少量的蓋玻片,用金屬鑷子夾住蓋玻片,在70%乙醇中浸泡,然后在火焰上烤干。要輕輕地鑷取,以防破裂為了方便起見,可以將蓋玻片浸泡于70%的乙醇中,使用時放在火焰上處理。如果使用的蓋玻片或載玻片數量較多,可以將它們放于的金屬支架上,然后高壓消毒。如果需要的數量更大,則可將其放在耐熱的容器中,干烤2小時。
(2)在無菌狀態下,把干燥的玻片放于適當的培養皿中。蓋玻片可以用金屬鑷子鑷取,圓形蓋玻片可以放在24孔培養板的孔中,直徑90mm的培養皿能夠放入10-15張蓋玻片,或者放入-張標準的載玻片。
(3)將懸浮的細胞放入組織培養皿中,培養至少24小時,讓細胞貼附在玻片上。要想得到一-個較好的結果,在加細胞時,密度應低,以防細胞密度過高。
(4)如果細胞數目有限,可把細胞懸液直接滴在玻片上,靜置4小時后再輕輕加入培養液。通過這種方式,大部分細胞將粘附于玻片上,然后再培養約24小時,使細胞適當擴增。此時,取出載玻片或蓋玻片可進行固定。
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