當前位置:> 供求商機> 流式雙染法檢測細胞凋亡實驗
凋亡和壞死,是常見的細胞死亡的兩種方式,它們有著截然不同的特征。凋亡是細胞程序性死亡的主要表現形式,是一個主動性的生理反應機制;壞死則是細胞對嚴重損傷的一種被動反應和變性過程。
Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內鈣離子依賴的磷酯結合蛋白,參與細胞內的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。
Annexin V選擇性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內側,即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期,不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面,即細胞膜外側。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。因此Annexin V是檢測細胞早期凋亡的靈敏指標。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞,呈現紅色熒光。對于壞死細胞,由于細胞膜的完整性已經喪失,Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內,與位于細胞膜內側的磷酯酰絲氨酸結合,從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及壞死細胞區分開來。
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