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大鼠ET-1檢測實驗服務的原理:
用純化的大鼠內皮素1(ET-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內皮素1(ET-1)再與HRP標記的ET-1抗體結合,形成抗體抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠皮素1(ET-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠內皮素1(ET-1)濃度。
大鼠ET-1檢測實驗服務的樣本處理要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉1分)。仔細收集上青,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000 轉1分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000 轉1分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集.上清。檢測細胞內的成份時,用PBS (PH7.2-7.4) 稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000 轉1分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入- -定量的PBS, PH7.4. 用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8"C的溫度。加入一定量的PBS (PH7.4), 用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于20C保存,但應避免反復凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP) 活性。
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