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凝膠遷移或電泳遷移率實驗是 一種研究DNA 結合蛋白和其相關的DNA 結合序列相互作用的技術,可用于定性和定 量分析。
這一技術初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特 定的 RNA 序列的相互作用。 通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的 DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復合物和非結合的 探針。DNA復合物或RNA復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研 究的結合蛋白的不同, 可是雙鏈或者是單鏈。 當檢測 如轉錄調控因子一類的DNA 結合 蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時,依 據目的RNA結合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質細胞抽提 液。 競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA 或RNA 的片段和寡核苷酸片段 (特異) 和, 其它非相關的片段(非特異) ,來確定DNA 或RNA 結合蛋白的特異性。在競爭的特異 和非特異片段的存在下,依據復合物的特點和強度來確定特異結合。
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