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RNA干擾(RNA interference,RNA i)是通過抑制轉錄后水平的基因表達而誘導功能缺失表型的有力工具。由ds RNA(double-stranded RNA)引發的特定基因表達受抑制現象稱為RNA干擾作用。 ds RNA(double-stranded RNA)可以介導基因沉默作用,以ds RNA為基點研究基因沉默的分子機制成為熱點。ds RNA指的是大于30個堿基對的RNA分子。哺乳動物細胞有至少2條路徑競爭雙鏈RNA(ds RNA),其一是特異性路徑:特殊ds RNA的序列用于RNAi,起始階段ds RNA被切成si RNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)。siRNA是RNA干擾作用賴以發生的重要中間效應分子,能提供一定的信息,允許一個特定的m RNA被降解。Si RNA正義鏈與反義鏈各有21個堿基,其中19個堿基配對,再每條鏈的3’端都有2個不配對的堿基。 另一條是非特異性路徑:只要有長的ds RNA的存在它可以降解所有的RNA,抑制所有蛋白質的合成。長的ds RNA激活蛋白激酶PKR,激活的PKR通過一系列的磷酸化關閉翻譯起始因子,導致翻譯抑制。也可以通過激活2’-5’AS 合成一個分子激活RNase L,導致非特異的RNA降解。 關于特異性的RNA作用機制模型,包括起始階段和效應階段。起始階段ds RNA在Dicer酶(RNase III家族中特異識別雙鏈RNA的一員,屬內切核酸酶)的作用下加工裂解21-23核甘酸長的小分子干擾RNA的片斷(siRNA)。Dicer含有解旋酶活性以及ds RNA結合域和PAZ結構。 在RNAi 的效應階段,siRNA雙鏈結構解旋并形成有活性的蛋白/RNA復合物(RISC)。由RISC中siRNA反義鏈與m RNA互補區域結合,隨后切割m RNA從而達到在RNA水平干擾基因表達。RISC由多種蛋白成分組成,包括核酸酶,解旋酶和同源RNA鏈搜索活性等
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