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大鼠超敏C反應(yīng)蛋白ELISA實驗客戶需提供大鼠血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本，或者由我司直接取材。

大鼠超敏C反應(yīng)蛋白ELISA實驗原理和操作步驟：

 應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)水平。用純化的
大鼠超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次
加入超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)，再與 HRP 標記的 hs-CRP 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標
抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并
在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)呈正相
關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠超敏 C
反應(yīng)蛋白（hs-CRP)濃度。

 
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔，在孔一、孔二中分別加標準品 100μl，然后在孔一、孔二中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從孔一、孔二中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 6μg/L，4μg/L ，2μg/L，1μg/L， 0.5μg/L）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。