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chip-seq蛋白技術服務

chip-seq蛋白技術服務簡單介紹： 染色質免疫共沉淀:染色質免疫共沉淀技術主要應用于驗證及探尋體內環境中，蛋白質和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白質在DNA上的特定結合序列，常在研究轉錄調控以及組蛋白修飾中被應用到。

實驗過程大致為：交聯-解交聯-超聲打碎-免疫沉淀-洗滌-DNA純化-PCR檢測。
 
具體操作：
樣品準備：培養細胞(若樣品為組織，可先培養原代細胞)；固定，或者直接活細胞送樣。
 
細胞固定：此步驟目的為將結合在DNA上的蛋白用共價形式交聯在所結合的位點上，避免在之后的操作步驟中脫離丟失。直接將甲醛加入細胞培養液，搖晃固定10分鐘后，迅速加入2.5M甘氨酸解交聯5分鐘，PBS洗滌，刮下細胞。
 
超聲打碎：此步驟目的為將長鏈的DNA打碎成200-1000bp的DNA的片段。使用設備是超聲水浴鍋，EP管在冰水混合物中超聲，超聲后細胞懸液變得澄清透明。離心取上清。
 
免疫沉淀：此步驟是加入特異性抗體和對照IgG，和結合抗體的磁珠（或protein A/G）。經稀釋后，超聲產物分成兩份，分別加入特異性抗體和對照IgG，輪轉過液，第二天加入磁珠輪轉4小時。
 
洗滌：此步驟是減少非特異性結合。分別用稀釋緩沖液、低鹽溶液、高鹽溶液、氯化鋰溶液以及TE緩沖液洗滌共7次。用洗脫緩沖液在65℃洗脫過液。
 
DNA純化：將洗脫的產物用DNA純化試劑盒純化，得到50ul純化產物，用于檢測ChIP結果。

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