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天根 動物組織總RNA提取試劑盒 DP431

RNAprep pure Tissue Kit 采用離心吸附柱和*的緩沖系統，可從動物組織中快速提取總RNA，可同時處理大量不同樣品。30-40 分鐘內即可完成反應，提取的總RNA純度高，沒有蛋白質和其他雜質污染。

天根 動物組織總RNA提取試劑盒 DP431

產品特點：

針對動物組織配置，操作更簡單、流程更優化。

配有DNaseⅠ，可有效去除DNA 污染。

RNA純度更高，無雜質殘留，特別適合于對純度要求很高的下游實驗。

操作安全可靠，無需酚/ 氯仿抽提，無需氯化銫梯度離心，無需氯化鋰或乙醇沉淀。

下游應用：

RT-PCR

Northern blot、Dot blot

Real-time RT-PCR

芯片分析

polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆

提示

樣本保存推薦使用RNAstore 樣本保存液(DP408)

進行組織樣本的保存。

預防RNase污染，應注意以下幾方面

1. 經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase污染。

2. 使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

3. RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

4. 玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10min，然后用水*清洗，再滅菌，即可去除RNase。

5. 配制溶液應使用RNase-Free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，混勻后放置過夜，高壓滅菌。）使用前注意事項1. 操作前在RL中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1 ml RL中加入10 μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。

6. 配好的RL 4℃可放置一個月，裂解液RL在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現，請加熱溶解后使用。2. 第一次使用前應在漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。

7. 以下操作如非指明，均在室溫下進行。DNase I儲存液的配制將DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個月）。

8. 注意：從-20℃融化后的DNase I儲存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

RNA純度及濃度檢測

完整性： RNA可用普通瓊脂糖凝膠電泳 (電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE電泳緩沖 液；150V，15 min)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA為rRNA，電泳后UV下應能看 到非常明顯的rRNA條帶。28S rRNA的量約為18S rRNA的兩倍，說明RNA的完整性較好。

純度：OD260/OD280比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的RNA，OD260/OD280讀 數在1.8-2.1之間，比值為2.0是高質量RNA的標志

。OD260/OD280讀數受測定所用溶液的pH值 影響。同一個RNA樣品，假定在10 mM Tris，pH7.5溶液中測出的OD260/OD280讀數1.8-2.1之 間，在水溶液中所測讀數則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純。

濃度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-Free ddH2O稀釋n 倍，用RNase-Free ddH2O將分光光度計調零，取稀釋液進行OD260, OD280測定，按照以下公式進行RNA濃度的 計算： 終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數n)×40

實驗例

組織取樣量展示

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