NK細胞分選試劑盒可用于從小鼠脾臟單細胞懸液中分離未經(jīng)標記的NK 細胞。非NK細胞(T細胞、DC 細胞、B細胞、粒細胞、巨噬細胞、紅系細胞)被生物素化的抗體和識別生物素的磁珠標記通過去除這些非NK細胞，從而得到高純度的NK細胞。

其分選原理為：用生物素結(jié)合的單克隆抗體混合物(作為一級標記試劑)和與磁珠結(jié)合的抗生物素單克隆抗體(作為二級標記試劑)對非靶細胞進行間接磁性標記。磁性標記的非目標細胞在分選器的磁場中被保留在分選柱中，而未標記的NK 細胞則通過分選柱流出。

試劑和儀器要求

緩沖液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）

分選柱和分選器。

(可選)熒光偶聯(lián)的抗體用于流式分析。

(可選)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死細胞。

(可選)死細胞清除試劑盒用于死細胞的清除。

(可選)預分離過濾器去除細胞團塊。

操作步驟

一、樣本準備

使用手動方法或組織解離器制備脾臟單細胞懸液。

二、磁珠標記

1.細胞計數(shù)。

2.300xg離心10分鐘。去除上清。

3.每107個細胞總量使用 40μL緩沖液重懸。

4.每107個細胞總量添加 10μLNK細胞生物素抗體混合物。

5.混勻，2-8℃孵育  5分鐘。

6.每107個細胞加入 2mL緩沖液洗滌細胞，300xg離心10分鐘，去上清。

7.每107個細胞添加 80μL 緩沖液。

8.每107個細胞添加 20μL抗生物素磁珠。

9.混勻，2-8℃孵育 10分鐘。

10.(可選)添加染色抗體。

11.進行細胞分選步驟。

三、細胞分選

xM或xL分選柱進行細胞分選

1.將分選柱置于相對應(yīng)的分選器中。

2.用適當體積的緩沖液潤洗分選柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）

3.將細胞懸液轉(zhuǎn)移至分選柱中。收集含有未標記細胞的流出液，即 NK細胞。

4.加適量的緩沖液，收集總流出物，并與步驟 3中的流出液混合，這是NK細胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）

5.(可選 )將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。加適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性標記的非NK細胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）

儲存溫度

2-8℃避光保存，請勿冷凍。有效期見試劑外標簽。

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