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蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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如何提高細胞轉染效率

時間:2022/11/15閱讀:1014
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細胞轉染是將外來核酸RNA或DNA 等小分子物質轉移到健康細胞中以產生“轉基因細胞"的過程。 在轉染過程中,外源核酸鏈進入健康細胞后,核酸與細胞中現有的 DNA 結合,形成一個轉基因細胞。細胞轉染過程中如何提高轉染效率,轉染效率的影響因素有哪些。
細胞轉染的主要方法是什么?
細胞轉染主要分為兩大類,即:穩定轉染和瞬時轉染。
     穩定轉染是將外源核酸繞過細胞膜,進入細胞,并通過核膜傳遞從而使外源核酸與宿主 DNA(或 RNA)整合以產生修飾基因。這種轉染方式所培育的細胞后代都將整合這種修飾基因,主要應用領域為:藥物篩選、研究形態變化、抗生素耐藥性等。
瞬時轉染是將外源核酸繞過細胞膜進入細胞,并且(如果是 DNA)通過核膜傳遞。與穩定轉染的區別是:外源 DNA 不會整合到宿主 DNA 中,而是通過蛋白質生產繼續表達自己。
      瞬時轉染方式的主要特點是:外源 DNA 不會傳遞給未來的細胞后代,所以環境因素改改變或細胞分裂產生都將終止表達。瞬時轉染有助于了解基因沉默、抑制性 RNA 和小規模蛋白質生產。
至于,實驗中選擇哪種轉染方法,其實主要取決于兩個因素:你的研究方向和正在使用的細胞區別。
細胞轉染方法
細胞轉染過程:
細胞轉染按細胞轉染過程的不同可以分為以下幾種:
生物轉染:通常被稱為轉導,方法是通過病毒感染方式將 DNA 整合到宿主細胞核中進行復制。也是醫學研究的常用方法。
化學 轉染:化學轉染法是通過陽離子聚合物和脂質體將核酸鏈帶入細胞。通過使細胞帶負電和聚合物帶正電,這兩者被吸引,最終核酸沉積在細胞中的細胞轉染方法。
物理轉染:物理轉染法是基于電流、激光的轉染方法。比如:通過電轉儀實現轉染或者通過光轉染的方式,使激光束會在特定的亞細胞位置產生孔洞,來傳遞外源核酸。
決定細胞轉染效率的因素有哪些?
決定細胞轉染效率主要的幾個因素:
1. 細胞群的生長態勢與細胞活力:-在創建細胞分析的過程中,細胞活力往往具有決定性的作用。如果沒有健康的細胞群,那么轉染效率也相對低下,甚至還會得到不正確和誤導性的結果。
2.細胞融合度:細胞的融合度衡量細胞在給定表面上的堆積程度(不要與細胞密度混淆)。50% 的細胞匯合意味著一半的表面被覆蓋。融合過少或過多都會影響細胞對轉染的接受程度。
3.細胞類型:不同類型的細胞具有不同的壽命、細胞壁特征及功能。比如部分細胞容易進行轉染,而有些細胞則本身就難以轉染,所以轉染效率也會存在差異。
4.轉染的核酸類型:不同核酸的復雜程度也不相同。比如:DNA的結構 比 RNA 復雜,而 RNA 比某些單獨的核酸鏈更復雜。一般來說,核酸復雜的,轉染過程相對困難,轉染效率相應也較低。
5.轉染方法:使用不同的轉染方法,所獲得的細胞轉染效率也是不一樣的。

如何提高轉染效率
     在不同的轉染過程(生物、化學、物理)中,隨著技術和工藝不斷改進,轉染效率也在不斷提升。例如,光學技術和激光精度的每一次進步都會對光轉染產生有利的影響。
但在此之前,提高細胞轉染效率的方法主要有:
1. 培養健康的活力指數高的健康細胞群。細胞分選儀可以降低細胞分選時高電壓對細胞的刺激,是輔助培養健康細胞群的重要工具。
2. 優化核酸,保證有效的核酸純度。 細胞轉染過程中需要確保所引入細胞的 DNA 和 RNA 盡可能接近同質。否則,分析結果時變量太多,轉染效率會因不同類型的基因進入細胞而變得混亂。轉染前,可以制備不同濃度核酸來用于細胞檢測的測試。例如,通過逐步制備 25-250 ng 的核酸濃度以針對實驗的細胞群進行測試,從而篩選出合適的轉染濃度從而提升轉染效率。
3.實時校正每個孔的細胞群,使每個孔內的細胞群盡量保持適宜的密度。
    當細胞大量聚集在一個孔中時,由于細胞接觸面會受到抑制,容易造成低轉染率。正常情況下,細胞的匯合度在大約 60-80%之間,轉染效率較高。
           蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司14年專注于生物實驗室儀器設備及實驗試劑耗材的供應,提供的生物試劑包括 細胞轉染試劑、轉染試劑盒、天根試劑盒、碧云天試劑等細胞學、分子生物學、生命科學相關的試劑及耗材,另外提供生物反應器、發酵罐、電轉儀、細胞成像儀、細胞計數儀、振蕩培養箱、移液器、離心機、顯微鏡、純水機等實驗室設備。


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