詳細介紹
iTRAQ(TMT)-多通量定量分析蛋白組學服務:
iTRAQ (Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation) 和 TMT(Tandem Mass Tag) 分別是由AB SCIEX和Thermo Scientific公司分別開發的、對trypsin酶解肽段進行標記的試劑盒。標記肽段通過LC-MS,能同時實現對蛋白質的鑒定和對蛋白質的相對定量分析。
iTRAQ和TMT的技術原理*一樣,區別在于:(1)生產商不同;(2)分子結構稍有差異;(3)標記通量有差異。iTRAQ有4標(4-plex)和8標(8-plex)2種規格,TMT有2標(2-plex)、6標(6-plex)和10標(10-plex)等3種規格。iTRAQ/TMT標記通量多樣,為實驗設計提供了更多的選擇性,有利于用戶根據自己的樣品數量,選擇合適的標記方案。
iTRAQ/TMT技術的優勢是能同時分析8-10組樣品,實驗周期短。但其不足體現在實驗步驟多,系統誤差較大。
iTRAQ(TMT)-多通量定量分析蛋白組學服務方案:
客戶只需提供樣本即可。我方負責完成后續所有實驗,包括:
蛋白質提取與trypsin酶解。
酶解肽段iTRAQ/TMT標記與混合。
混合肽段HPLC分離,收集餾分。
對每個餾分進行LC-MS測試。
MS數據定性及定量分析,篩選差異表達的蛋白質。
差異表達蛋白常規生物信息學分析。
我方該服務的優勢體現在:(1)樣品通常分為15個餾分;(2)每個流程LC-MS測試時間為2h,共計測試15×2=30h。餾分和測試時間的增加,能顯著提高蛋白質鑒定數目和蛋白質定量的準確度。