HPLC 色譜儀器可以是一組單獨的模塊或元件，但也可以設計為單個裝置。模塊概念在單個組件失效的情況下更加靈活；此外，系統各個零件不必來自同一制造商。如果您不喜歡自己進行小修，您會更喜歡緊湊型儀器。然而，這并不需要比模塊化套件更少的工作臺空間。
一臺 HPLC 儀器至少具有溶劑罐、帶篩板的傳輸線、高壓泵、進樣裝置、色譜柱、檢測器組成部分。
一、高效液相色譜儀
HPLC 儀器通常由九個基本組件組成：流動相/溶劑容器、溶劑輸送系統、樣品引入裝置、色譜柱、柱后裝置、檢測器、數據收集和輸出系統、檢測器后洗脫液處理以及連接管和配件。使用一種以上的溶劑是很常見的，因此需要混合器和控制器。如果數據采集是由計算機完成的，它也可以用于整個系統的控制。
二、溶劑罐
滿足系統不間斷運行的足量HPLC溶劑的儲存，并由特氟龍管通過在線脫氣和過濾器輸送到泵中。一般來說，一個系統中至少有兩個儲液器，通常是玻璃瓶。儲液罐及其附件將由玻璃、特氟隆或不銹鋼材料制成，這樣流動相就不會受到污染。通常，我們使用 HPLC 級甲醇、乙腈、水和緩沖液作為流動相。流動相最好是新鮮調配，如果靜置4-5個小時都有可能會發生污染，因此建議流動相進入系統前，使用恒譜生溶劑過濾器進行過濾處理，過濾污染物。
二、泵
HPLC 泵將能夠以不同的流速使用單個或多個容器以無脈沖輸出吸取溶劑，以允許來自多個容器的不同溶劑/流動相的受控混合。往復泵、注射泵和氣動泵是 HPLC 泵的類型。泵的作用是迫使液體（稱為流動相）以特定流速通過液相色譜，以毫升每分鐘 (mL/min) 表示。
HPLC中的正常流速在1-2mL/min 范圍內。在色譜實驗期間，泵可以輸送恒定的流動相組成（等度）或增加的流動相組成（梯度）。
三、混合單元
混合單元用于混合不同比例的溶劑并通過色譜柱子。
有兩種類型的混合單元：低壓混合室，使用氦氣對溶劑進行脫氣；高壓混合室不需要氦氣來脫氣溶劑。
溶劑的混合使用裝有珠子的靜態混合器或使用磁力攪拌器并在高壓下運行的動態混合器來完成。
四、溶劑脫氣
有幾種氣體可溶于有機溶劑。在高壓下泵送溶劑時，會形成氣泡，這會干擾分離過程、穩定的基線和峰的形狀。因此需要進行脫氣。這可以通過使用以下技術來完成：
真空過濾：可以去除氣泡，但并不總是可靠和完整。
氦氣吹掃：通過使氦氣通過溶劑。這是非常有效但昂貴的。
超聲波：通過使用超聲波儀，將超高頻轉換為機械振動。這導致氣泡的去除。
五、色譜柱
色譜柱是 HPLC 系統的核心，它實際上會分離樣品混合物中的分子。柱子位于進樣器后，流動相與固定相接觸，形成與巨大表面的界面。近年來大多數色譜的發展導致設計了許多不同的方法來增加這種界面接觸。通常 HPLC 色譜柱的長度為 30 至 250 毫米，直徑為 01 至 05 毫米，孔徑為 03、05 和 10 微米。色譜柱填充了多孔顆粒，由聚合物制成，并由一層薄薄的二氧化硅和聚苯乙烯（例如 C8、C18 色譜柱）。恒譜生ODS-AQ反相硅膠色譜柱是采用鍵合距離優化技術的C18柱，嚴格控制硅膠表面鍵合C18長鏈之間的距離，加大固定相與流動相尤其是水的接觸面，從而提高極性化合物的保留力。
管道結構材料：
不銹鋼（具有高壓能力），恒譜生的色譜柱空柱管總成都是采用醫療衛生級的不銹鋼材質，可耐高壓不易損壞。
玻璃（主要用于生物分子）
PEEK（聚醚醚酮）聚合物（對大多數溶劑具有生物相容性和化學惰性）
六、探測器
檢測器是用于檢測從色譜柱中洗脫的樣品和色譜柱流出物的工具。檢測器將數據轉換為電信號并由系統記錄。最常見的檢測器 UV/VIS 用于藥物分析，它允許在特定波長或范圍波長（使用 PDA 檢測器）上連續監測 UV 吸收。檢測器流通池中存在的成分會導致吸光度發生變化。
高效液相色譜的應用主要是定性分析、檢查化合物的雜質、定量分析、藥物分離鑒定成分混合物的分離和鑒定、生物制藥和藥代動力學研究、穩定性研究、純化等。
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