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[供應(yīng)](C/N: CE201)-iElisa * B1 檢測試劑盒
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  • (C/N: CE201)-iElisa * B1 檢測試劑盒
貨物所在地:
湖南長沙市
產(chǎn)地:
美國
更新時間:
2024-07-18 21:00:06
有效期:
2024年7月18日 -- 2025年1月18日
已獲點擊:
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產(chǎn)品簡介

iElisa * B1 檢測試劑盒

iElisa * B1 檢測試劑盒

iElisa * B1 檢測試劑盒

詳細(xì)介紹

iElisa * B1 檢測試劑盒

iElisa * B1 檢測試劑盒

1. 概要 *是黃曲霉和寄生曲霉的有毒的代 謝產(chǎn)物,主要存在于谷物、堅果和飼料中。1993 年 * B1 被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研 究機(jī)構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物,是一類毒性*的劇毒 物質(zhì)。它被證明對人和動物的肝臟、腎臟等組織和 器官具有很大的危害。中國標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:* B1 在玉米、大米、小麥中*分別不得超過 20、 10、5μg/kg,各種飼料中* B1 的*標(biāo) 準(zhǔn)為 10-50μg/kg。 2. 原理 測定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有 抗抗體。加入* B1(AF-B1)標(biāo)準(zhǔn)品或樣 品、酶標(biāo)抗原和抗體后,游離的* B1 與 酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體,抗體或抗體結(jié)合物與固定 在微孔板上的抗抗體再結(jié)合,沒有結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品、 酶標(biāo)抗原及抗體被洗去,加入 TMB 底物顯藍(lán)色, 加入終止液后顏色由藍(lán)變黃,用酶標(biāo)儀在 450nm 處 檢測,吸光值與樣品中* B1 含量成負(fù)相 關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出* B1 的含 量。 3. 試劑盒的組成 1) 包被有抗抗體的96微孔板:1塊(96 孔,12條 ×8 孔) 2) *B1標(biāo)準(zhǔn)品:0 ng/ml、0.1 ng/ml、 0.3ng/ml、0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.0ng/ml 4.0ng/ml 1 瓶 × 1.0ml 3) AF-B1酶標(biāo)抗原 1 瓶 ×10ml 4) AF-B1抗體 1 瓶 ×10ml 5) 10× 濃縮洗滌液: 1 瓶 × 50ml 6) AF-B1稀釋緩沖液A: 1 瓶 ×50ml 7) AF-B1稀釋緩沖液B: 1 瓶 ×50ml 8) 顯色底物TMB: 1 瓶 ×17ml 9) 終止液: 1 瓶 × 7ml 10) 試劑盒說明書: 1 份 11) 質(zhì)檢報告: 1 份 4. 需要的儀器、試劑 1)儀器 —酶標(biāo)儀 450nm(iElisa 全自動酶標(biāo)儀或相當(dāng)者) —微量移液器:20μl-200μl 單道,100μl-1000μl 單道, 50μl-300μl 八道 —多功能旋轉(zhuǎn)混合器(或者搖床、高速均質(zhì)器) —酶標(biāo)板振蕩器 —渦旋混合器 —氮氣吹干儀 —50ml 離心管 —1.5ml 離心管 —離心機(jī) —定性濾紙 —過濾漏斗 —天平:感量 0.01g 2) 試劑 —樣品提取液 70%甲醇:取 700ml 甲醇,加 300ml 純水,混勻。 —純水(蒸餾水、去離子水)、正己烷、三氯甲烷、 甲醇 5. 樣品處理 5.1 谷物(玉米、小麥、大麥、大米、大豆): 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉(zhuǎn) 混合器上振蕩 10 分鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì) 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 200μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩 沖液 A,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數(shù):12.5 5.2 飼料: 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉(zhuǎn) 混合器上振蕩 10 分鐘(或使用高速均質(zhì)器均 質(zhì) 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,用 0.22μm 有機(jī)系 濾膜過濾后,取 100μl 濾液置于 1.5ml 離心管 中,加入 500ul AF-B1 稀釋緩沖液 B,用渦旋 混合器混勻。 稀釋倍數(shù):305.3 植物油 1)稱取 2.5g 油樣品,加入 10mL 樣品提取液(70% 甲醇水),劇烈振蕩 3min(用手或振蕩器),或 搖床震蕩 10min。 2) 將提取液用普通濾紙過濾。吸取 200μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩 沖液 A,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數(shù):10 倍 5.4 醬油、醋: 1) 取 5.0ml 樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 三氯甲烷置于多功能旋轉(zhuǎn)混合器上振蕩 10 分 鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì) 3 分鐘,或搖床上 振蕩 40 分鐘)。 2) 4000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘,取下層三氯甲烷溶液 5ml 與氮氣吹干儀(60℃)吹干。加入 4ml 70%甲 醇水渦旋混勻 1 分鐘,使其充分復(fù)溶。 3) 吸取 200μl 復(fù)溶液置于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩沖液 A,用渦旋混合器混 勻。 稀釋倍數(shù):10 5.5 糕點: 1) 取 5.0g 樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 70% 甲醇水置于多功能旋轉(zhuǎn)混合器上振蕩 10 分鐘 (或使用高速均質(zhì)器均質(zhì) 3 分鐘,或搖床上振 蕩 40 分鐘)。 2) 定性濾紙過濾,取濾液 5ml 加入 10ml 三氯甲烷 渦旋 1min,4000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘,取下層澄清三 氯甲烷溶液 5ml 與氮氣吹干儀(60℃)吹干。 加入 2ml 70%甲醇水渦旋混勻 1 分鐘,使其充 分復(fù)溶。 3) 吸取 200μl 復(fù)溶液置于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩沖液 A,用渦旋混合器混 勻。 稀釋倍數(shù):10 5.6 酒類(白酒、啤酒、威士忌、櫻桃酒、葡萄酒 等) 1) 取 5.0ml 樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 三氯甲烷置于多功能旋轉(zhuǎn)混合器上振蕩 10 分 鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì) 3 分鐘,或搖床上 振蕩 40 分鐘)。 2) 3000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘,取上層澄清溶液 5ml 于氮 氣吹干儀(60℃)吹干。加入 5ml 70%甲醇水 渦旋混勻 1 分鐘,使其充分復(fù)溶。 3) 吸取 200μl 復(fù)溶液置于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩沖液 A,用渦旋混合器混 勻。 稀釋倍數(shù):12.5 5.7 發(fā)酵液: 1) 吸取 40μl 液體樣品置于 1.5ml 離心管中 2) 加入 960μl AF-B1 稀釋緩沖液 B,用渦旋混合 器混勻。 稀釋倍數(shù):25 5.8 尿液樣品: 1) 取 5ml 待檢樣品于 15ml 離心管中,3000r/min, 離心 10 分鐘 2) 吸取 100μl 離心后澄清樣品置于 1.5ml 離心管 中 3) 加入 400μl AF-B1 稀釋緩沖液 A,用渦旋混合 器混勻。 稀釋倍數(shù):5 5.1 豆瓣醬等: 1) 稱取 5.0g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加入 25.0ml 樣品提取液 70%甲醇,置于多功能旋轉(zhuǎn) 混合器上振蕩 10 分鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì) 3 分鐘,或搖床上振蕩 40 分鐘)。 2) 將提取液用普通濾紙過濾,吸取 200μl 濾液置 于 1.5ml 離心管中,加入 300μl AF-B1 稀釋緩 沖液 A,用渦旋混合器混勻。 稀釋倍數(shù):12.5 6. 酶聯(lián)免疫分析程序 6.1 測定之前注意事項 1) 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)。 2) 使用后迅速將試劑放入 2-8℃冷藏。 3) 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 程序中的要點。 4) 所有溫育過程應(yīng)避免陽光直射,并按要求用蓋 板覆蓋住酶標(biāo)板。 6.2 溶液的配制 1) 提取液的配制: 根據(jù)實驗所需的量配制 70%的 甲醇水溶液(水要用純水、或蒸餾水、去離子 水) 2) 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋 10 倍后使用。(例如:取 10 ml 濃縮液+90 ml 純 水, 可以用于 32 孔的檢測)。 6.3 測定程序 1) 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品所用數(shù)量的孔條插入酶標(biāo)板架,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個平行實驗,記錄 下標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。未使用的酶標(biāo)板用鋁箔 袋封好置 2-8℃冷藏保存。 2) 吸取 50μl 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品分別加至相應(yīng)的微孔 (雙孔)中,然后各加入 50μl AF-B1 酶標(biāo)抗原, 再加入 50μl AF-B1 抗體,加蓋,在室溫溫育 20 分鐘(每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品必須使用新的吸 頭)。 3) 倒出孔中的液體,每孔加入 250μl 稀釋好的洗 滌液,置于酶標(biāo)板振蕩器上振蕩 30 秒鐘(或 者手工振蕩),重復(fù)操作四次。洗完后用力在 吸水紙上拍干。 4) 每孔加入150μl顯色底物TMB,室溫避光溫育 10分鐘。 5) 每孔加入50μl 終止液。 6) 置于酶標(biāo)儀中,振蕩混勻,在450nm處測定吸 光度值(OD值),參比波長630nm。(iElisa全 自動酶標(biāo)儀可以直接讀出、打印濃度值)。 7. 結(jié)果判定 1)所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的 平均值(B)除以*個標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光 度值(B0)再乘以 *,即百分吸光度值。 百分吸光度值(%)= B ×* B0 以* B1 標(biāo)準(zhǔn)品濃度值(ppb)為 X 軸, 百分吸光度值為 Y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。相對應(yīng)每 一個樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。也可以用 回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機(jī)專 業(yè)軟件,更便于大量樣品的快速分析。 2) 樣品的實際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍 數(shù)。 3) 如果測定值超出檢測范圍,樣品提取溶液按一 定的比例用 70%甲醇進(jìn)行稀釋。 8. 注意事項 1) 室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫(20- 25℃)會導(dǎo)致數(shù)值偏低。 2) 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況, 則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn) 象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對光敏感,避免直接暴露在 光線下。 4) 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn) 液的時候都必需充分混合均勻)。 5) 終止液為強(qiáng)酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。 6) 不要使用過了有效期的試劑盒,也不要混合使 用不同批次的試劑盒,這樣會引起測定結(jié)果不 準(zhǔn)確。 7) 試劑盒的儲存條件是2-8℃,切勿冷凍。 9. 試劑盒的性能指標(biāo) 1) 檢測限 LOD: 谷 物 0.6ppb(μg/kg) , 飼 料 1.8ppb(μg/kg),植物油 0.6ppb(μg/kg),醬油、 醋 0.6ppb(μg/kg),糕點 0.6ppb(μg/kg),酒類 0.6ppb(μg/kg),發(fā)酵液 1.5ppb(μg/kg),尿液類 0.3ppb(μg/kg),豆瓣醬 1.0ppb。(LOD:空白樣 品測定值+2 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差 SD) 2) 定量限 LOQ: 谷 物 1.25ppb(μg/kg) , 飼 料 3.0ppb(μg/kg),植物油 1.0ppb(μg/kg),醬油、 醋 1.0ppb(μg/kg),糕點 1.0ppb(μg/kg),酒類 1.25ppb(μg/kg),發(fā)酵液 2.5ppb(μg/kg),尿液類 0.5ppb(μg/kg),豆瓣醬 2.0ppb。 3) 定 量 檢 測 范 圍 : 谷 物 1.25-50ppb , 飼 料 3.0-120ppb ,植物油 1.0-40ppb , 醬 油 、 醋 1.0-40ppb,糕點 1.0-40ppb,酒類 1.25-50ppb, 發(fā)酵液 2.5-100ppb, 尿液類 0.5ppb-20ppb,豆瓣 醬 2.0-50ppb。

 

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