化工儀器網
技術文章
使用細胞爬片時的準備及操作方法有哪些？
閱讀：1184 發布時間：2023-4-25浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時，再用三蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不干凈的話，細胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養皿中烘干后進行高壓消毒。高壓后取出放入烤箱中烤干，備用。烤干后可放入超凈臺中。
4.多聚賴氨酸的使用：
很多人都將玻片用此處理，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸，細胞貼壁仍然很好，且在做后續的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。
細胞爬片的操作
1.胰酶消化細胞后計數重懸細胞于培養基中。
2.加細胞前，根據玻片的大小，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養基，使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。(整個過程注意無菌操作)
3.根據自己的需要選擇合適的細胞密度接入培養板內即可。
4.待細胞貼壁后，可去上清加含藥培養基。
5.按照實驗設計，作用一定時間后取玻片。取玻片時由于玻片與培養皿底結合較緊，張力較大，一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時間點的實驗的話，將所需數量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續培養。
細胞爬片的固定
另外在保存細胞爬片的時候，一般用培養皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實驗時取片。
細胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。當然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落。
然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。