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使用熒光濾光片需要注意哪些
熒光濾光片一般包含三片組合，即激發(fā)濾光片、發(fā)射濾光片和二色鏡。有的系統(tǒng)不帶二色鏡，這由光路結(jié)構(gòu)決定。有的系統(tǒng)用激光進(jìn)行激發(fā)，不需要激發(fā)濾光片。
激發(fā)濾光片：在熒光顯微鏡中，只有激發(fā)熒光的波長可通過的濾光片。過去使用的是短波通濾光片，現(xiàn)在基本上都使用帶通濾光片。與顯微鏡的光路呈45°角放置。
在基因表達(dá)分析中，熒光濾光片可以用來減少檢測(cè)樣品量，提高檢測(cè)效率，并增強(qiáng)PCR檢測(cè)的靈敏度和特異性。它有助于熒光標(biāo)記物從原始樣品中分離出來，以防止影響重復(fù)實(shí)驗(yàn)中熒光信號(hào)檢測(cè)的不確定因素。
在生物標(biāo)志物鑒定和基因組等研究中，熒光濾光片也可以通過精準(zhǔn)有效地檢測(cè)出少量的核酸片段，大大提高分子檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
熒光濾光片使用須注意：
1、濾光片的順序不能顛倒，在透射熒光顯微鏡中，最靠近光源處為吸熱濾光片，次之應(yīng)放置激發(fā)濾光片組合，而后為被檢標(biāo)本，最后安放阻擋濾光片。在落射熒光顯微鏡應(yīng)用中，在激發(fā)濾光片和被檢標(biāo)本之間必須加進(jìn)色光分離反射濾光片(FT或RKP)。
2、使用濾光片時(shí)必須遵守斯托克斯定律，吸熱濾光片的透射波長<激發(fā)濾光片的透射波長<色光分離反射濾光片的透射波長<阻擋濾光片的透射波長。
3、使用濾光片時(shí)必須注意配用濾光片的透射譜線之間愈是相互靠近愈好。