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購買到原代細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么事項(xiàng)
原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。對原代細(xì)胞最直觀的理解，就是不能無限傳代下去，不論你是自己提取的細(xì)胞還是從試劑公司購買的細(xì)胞，都會建議你在P2-P3代完成實(shí)驗(yàn)是*。所以，掌握提取和培養(yǎng)原代細(xì)胞的技巧，盡可能地讓細(xì)胞的好狀態(tài)多維持幾代，對實(shí)驗(yàn)成敗來說至關(guān)重要。那么對已經(jīng)購買的細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么注意事項(xiàng)呢
1. 收到細(xì)胞時(shí)，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細(xì)胞的前幾天，要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄，以防細(xì)胞出現(xiàn)問題后，可以跟公司很好地溝通。
2. 收到細(xì)胞后，不要馬上處理。應(yīng)置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。
3. 細(xì)胞的第一次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細(xì)胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。
4. 原代細(xì)胞傳代時(shí)(內(nèi)皮細(xì)胞，貼壁為例)，0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec，再加入5ml培養(yǎng)基(正常消化貼壁細(xì)胞，我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1，但是原代細(xì)胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶)。
5. 原代細(xì)胞不建議凍存，因?yàn)閮龃婧苋菀讖?fù)活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9(血清):1(DMSO)。
6. 原代細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，置于37-38度水浴融化細(xì)胞，并加入10ml培養(yǎng)液(正常貼壁細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，也可以使用這種比例，復(fù)蘇成活率會大大提高)，離心重懸鋪板。