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關(guān)于血清常見問題解決小集合
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、 多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn) 細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。
關(guān)于血清的幾種常見性問題
1. 正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？
血清為動(dòng)物來源，成分復(fù)雜，不同批次間會(huì)存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。
2. 血清應(yīng)如何保存？
未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標(biāo)識(shí)的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。
3. 血清應(yīng)如何融解？
從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時(shí)旋轉(zhuǎn)(swirling mix)混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用
4. 為什么有時(shí)血清中出現(xiàn)絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？
多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成，常見的原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。
5. 為什么存放于冰箱中的血清會(huì)出現(xiàn)沉淀？如何避免該現(xiàn)象？
在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會(huì)形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白(fibrin)，單體時(shí)處于溶解狀態(tài)，在凍融過程中會(huì)發(fā)生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會(huì)影響血清的性能。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般常用的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時(shí)間放置。
6. 血清是否需要做滅活處理？
這取決于您的應(yīng)用。
滅活過程中，會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí)，才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。常見的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白，因?yàn)檠a(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷，巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化，肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
7. 如何進(jìn)行血清滅活處理？
血清請(qǐng)先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時(shí)請(qǐng)將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。應(yīng)該準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度)，滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計(jì)，加熱過程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到56℃左右，開始計(jì)時(shí)。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。
8. 為什么需要對(duì)血清進(jìn)行g(shù)amma射線輻照？
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。
9. 如何應(yīng)對(duì)血清的批間差？
血清產(chǎn)品通過嚴(yán)格的質(zhì)控盡可能縮小批間差，但由于血清本身的特點(diǎn)和來源，無法*避免批間差。客戶可以通過做預(yù)測(cè)試等方式，選擇可滿足要求的血清批次。