SURE Electro
SURE Electroporation-Competent Cell

產品規格:








SURE 電轉化感受態細胞基因組:

E. coli B e14-(mcrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC

umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)]


SURE 電轉化感受態細胞簡要說明:

SURE 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。真核生物 DNA 存在較多“十字型”、“Z 字型”等二 級或三級結構，這種 DNA 結構在利用傳統大腸桿菌進行克隆時易被大腸桿菌體內的重組酶系統或其他防御系統識別并 對其進行重組，刪除等破壞，導致很難對這類 DNA 進行正確的克隆操作。SURE 菌株可以解決這些問題：此菌株體內 重組酶系統整條通路被破壞，并且 (mcrA-, mcrCB-, mcrF-, mrr-, hsdR-)這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外 源 DNA 進行標記、限制，提高了外源甲基化 DNA 的克隆效率，同時具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recB recJ) 突變，增強了外源 DNA 的穩定性。存在于 F´因子上的 lacIqZΔM15 基因使此菌株可以進行藍白斑篩選；KanR，TetR 賦予菌株卡那霉素和四環素抗性。-CMbio-
-CMbio-SURE 電擊感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA。

SURE 電轉化感受態細胞簡要操作說明：
1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使乙 醇充分揮

發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中 靜置 5 分鐘充分降溫。 2. 取-80℃保存的 SURE 電擊感受態細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質粒或連接產物) 并用手EP 管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。-CMbio-
A. 測定轉化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質粒  pUC19；-CMbio-

B. 對于連接產物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 懸，DNA 濃度不超過 100 ng/μl，體積不超過 5 μl/50  μl 感受態。 -CMbio-
3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm 槍尖)將感受態-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉儀推薦參數，也可按所用 電轉儀 推薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。-CMbio-
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 1ml 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊杯 底部數次混勻后，轉移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等），向離心管中 補加 S.O.C. 培養基至 10 ml。 傾斜 45 度放入搖床，37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘。-CMbio-
6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大， 若全部涂 板請選用直徑 15cm 培養皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養 13-17 小時。-CMbio-

SURE 電轉化感受態細胞注意事項：
1. 加入 DNA 時體積不應大于感受態體積的 1/10。-CMbio-

2. 電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。-CMbio-

3. 當 DNA 不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。-CMbio-

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和 DNA 的溶液中產生電流和弧光放電的風險。

5. 若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個 數量級。 -CMbio-

6. 對于連接產物轉化，轉化前乙醇沉淀 DNA 后用適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產

物，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。 7. 混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃 度的質粒或連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。-CMbio-
8. 電擊感受態細胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。-CMbio-